膜性肾病大鼠足细胞转分化情况及川芎嗪对其影响的实验研究

膜性肾病大鼠足细胞转分化情况及川芎嗪对其影响的实验研究

论文摘要

目的:观察阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)诱导的大鼠膜性肾病(MN)肾小球足细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的表达情况以及川芎嗪(TMP)对它们的影响,探讨MN足细胞转分化发生的情况及TMP对MN的防治作用和可能治疗机制。方法:雄性SD大鼠96只随机分为对照组、模型组、TMP干预组,每组32只,对照组,不预免,不造模,在模型组、TMP干预组正式免疫的同时,隔日尾静脉注射1ml生理盐水(NS)代替C-BSA,同时,每日腹腔注射2ml NS代替TMP;模型组、TMP干预组均按改良Border法复制MN大鼠模型,且TMP干预组于正式免疫的第1周起,腹腔注射TMP注射液(100mg/kg/d),模型组于正式免疫的第1周起,腹腔注射2ml NS代替TMP。正式免疫第1、2、3、4周末每组各取8只杀检,并于处死前检测24小时尿蛋白定量(24hUTP)及尿肌酐(Ucr)浓度;取血行血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血浆白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐清除率(Ccr)检测;取大鼠肾组织进行光镜、电镜及免疫荧光鉴定成模情况并观察不同时间点肾小球基底膜(GBM)增厚情况;采用间接免疫荧光双标技术法标记WT-1/a-SMA和WT-1/FN,标记定位足细胞,动态检测足细胞中a-SMA、FN蛋白的表达情况,并分别对肾小球内a-SMA、FN、Ccr、GBM的相对含量之间进行相关分析。结果:(1)肾脏形态学改变对照组肾脏形态颜色正常,各时间点肾组织均未见形态学改变;模型组、TMP干预组在第1周末,肾脏形态颜色未见明显异常,肾组织病理学可见轻度改变,随实验时间延长肾脏颜色逐渐苍白,体积逐渐增大,肾脏病理损害逐渐加重,第4周末可见肾脏明显肿大,质地变硬,颜色苍白,呈“大白肾”样外观,光镜下见肾小球肿大明显,部分球囊腔狭窄,GBM弥漫性增厚,GBM上皮侧可见GBM基质反应产生的“钉样突起”形成,随着GBM不断反应,部分GBM呈现“双层梯样"外观,肾间质显著增宽,间质可见胶原纤维沉积,纤维化程度较重。电镜示:GBM增厚明显,肾小球上皮下有大量电子致密物沉积,肾小球足细胞广泛足突融合,变平或消失。免疫荧光示:对照组肾组织各时间点未见IgG沉积;模型组自第2周起可见肾小球毛细血管壁及系膜区有微弱IgG荧光沉积,随着实验时间延长,荧光强度逐渐增强,呈弥漫性的散在荧光颗粒状,荧光强度为+++~++++,以第4周末最为明显;与模型组相比,TMP干预组各时间点肾小球毛细血管壁及系膜区IgG荧光强度有所减弱。(2)肾小球足细胞内α-SMA、FN蛋白的动态表达:对照组:α-SMA未见表达,FN在肾小球足细胞内有少量表达,呈红色荧光,荧光强度较弱,WT-1仅在肾小球足细胞分布区域细胞核内有较多表达,呈绿色荧光;模型组和TMP干预组:α-SMA、FN在肾小球足细胞内有较多表达,呈红色荧光,荧光强度较强,表达量随实验时间延长呈逐渐上升趋势,荧光强度逐渐增强,与对照组相比,模型组、TMP干预组α-SMA、FN明显增多,荧光强度增强,与模型组相比,TMP干预组α-SMA、FN减少,荧光强度减弱,具有统计学意义(P<0.05);模型组、TMP干预组WT-1与α-SMA及WT-1与FN共同表达区域呈黄色荧光,与模型组相比,TMP干预组黄色荧光减少。(3)临床指标变化:对照组各指标正常;模型组24h UTP、Scr、BUN、TG、TC水平升高,Alb、Ccr水平降低,其中以24h UTP、Scr、BUN、Alb变化较为显著(P<0.05);与模型组相比较,TMP干预组24h UTP、Scr、BUN、TG、TC水平降低,Alb、Ccr水平升高,以第4周末,Scr、BUN、Alb的变化最为明显(P<0.05)。(4)4周末各指标相关性分析:在肾小球内,对照组FN与GBM厚度呈正相关;模型组、TMP干预组a-SMA与FN、GBM厚度分别呈正相关,与Ccr呈负相关。结论:(1)MN大鼠肾小球足细胞中有α-SMA表达,且随着造模时间延长表达逐渐增多,表明MN发展过程中存在足细胞转分化。(2)MN大鼠肾小球足细胞中FN随着造模时间延长逐渐增多,且α-SMA与FN、GBM厚度呈正相关,表明MN足细胞转分化过程中合成ECM成分增加是导致ECM积聚,GBM增厚的原因之一。(3)TMP可减少MN大鼠肾小球足细胞中α-SMA的表达,在一定程度上抑制足细胞转分化,减少FN的生成,从而减少ECM积聚,减轻肾脏病理损害,对肾脏具有一定的保护作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 英汉缩略词对照表
  • 致谢
  • 足细胞凋亡与膜性肾病的研究进展(综述)
  • 参考文献
  • 相关论文文献

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