人绒毛膜癌JEG-3细胞中Sp1对KDR转录表达的调控

人绒毛膜癌JEG-3细胞中Sp1对KDR转录表达的调控

论文摘要

背景绒毛膜癌(choriocarcinoma,CC)(简称绒癌)是来源于胎盘绒毛滋养细胞的恶性肿瘤,主要经血液播散,转移发生早且广泛。目前,致绒癌患者死亡的主要原因之一,就是未能及时并有效的控制绒癌细胞转移的发生和发展。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是最重要的肿瘤血管生成调控因子之一,通过与其受体激酶功能区受体(kinase insert domain containing receptor,KDR)结合,发挥促进肿瘤血管生成的作用,为肿瘤细胞的生长、增殖、转移,提供重要的物质基础。KDR主要分布在肿瘤区新生血管内皮表面,VEGF通过旁分泌机制起作用。此外在某些肿瘤细胞中亦发现有KDR的表达,预示VEGF还存在自分泌调节途径。绒毛膜癌是一个高度血管化的恶性肿瘤,已证实VEGF在其中表达,但KDR表达情况如何,尚未见系统研究。而特化蛋白1(special protein 1,Sp1)是一种普遍存在于哺乳动物细胞中的转录调节因子,KDR在转录水平上可能受其调节。目的检测人绒毛膜癌JEG-3细胞中Sp1和KDR mRNA表达,并以Sp1反义寡核苷酸干扰JEG-3细胞,证明KDR在转录水平上受Sp1的调控,通过探讨影响KDR表达的因素,为临床抗绒癌转移治疗提供新的思路。方法逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测JEG-3细胞中Sp1和KDR mRNA的表达情况。通过脂质体转染试剂lipofectamineTM 2000,将Sp1反义寡核苷酸转染到JEG-3细胞中,Sp1反义寡核苷酸终浓度分别为0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.3μmol/L、0.4μmol/L、0.5μmol/L,同时设立空白对照组和终浓度为0.5μmol/L的正义序列对照组。RT-PCR检测不同组别JEG-3细胞中Sp1、KDR mRNA的表达,图象分析系统分析扩增条带光密度值,以GAPDH为内参,计算mRNA相对表达水平。结果(1)在JEG-3细胞中检测到Sp1和KDR mRNA的表达。(2)Sp1反义寡核苷酸对JEG-3细胞Sp1和KDR mRNA的表达均有明显抑制作用,与正义序列组和空白对照组比较有显著差异(P<0.05)。(3)用0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.3μmol/L、0.4μmol/L、0.5μmol/L5个浓度的Sp1反义寡核苷酸处理24小时后,Sp1 mRNA、KDRmRNA的表达均受到抑制,其中以0.5μmol/L的Sp1反义寡核苷酸浓度抑制作用最明显,且Sp1反义寡核苷酸对JEG-3细胞Sp1、KDR表达的抑制作用呈浓度依赖性(P<0.05)。(4)正义序列和空白对照的JEG-3细胞中Sp1、KDR的表达没有显著差异(P>0.05)。结论(1)人绒毛膜癌JEG-3细胞中有血管内皮生长因子受体KDR的表达,说明VEGF不仅通过调节血管新生促进肿瘤生长,还可能直接作用于肿瘤细胞,对绒毛膜癌转移的发生发展起着重要作用。(2)Sp1反义寡核苷酸以剂量依赖性方式有效抑制JEG-3细胞中的Sp1 mRNA表达。(3)人绒毛膜癌JEG-3细胞中有转录因子Sp1的表达,且Sp1可能从转录水平上调控血管内皮生长因子受体KDR的表达。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 中英文缩略词
  • 一、论文正文
  • 第一章 前言
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 细胞系
  • 2.1.2 主要实验试剂及耗材
  • 2.1.3 仪器
  • 2.1.4 Sp1寡核苷酸的设计与合成
  • 2.1.5 PCR扩增引物序列
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 细胞培养及实验分组
  • 2.2.2 ODN转染 JEG-3细胞过程
  • 2.2.3 RT-PCR检测
  • 2.3 统计学处理
  • 第三章 结果
  • 3.1 JEG-3细胞的培养
  • 3.2 RT-PCR检测在 JEG-3细胞中Sp1和 KDR mRNA的表达
  • 3.3 RT-PCR检测不同组别JEG-3细胞中Sp1与KDR mRNA的表达水平
  • 第四章 讨论
  • 4.1 抗血管生成与肿瘤治疗
  • 4.2 KDR的表达特异性
  • 4.3 Spl对KDR转录水平的调控
  • 4.4 反义核酸技术在抗肿瘤治疗中的应用
  • 4.5 总结
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 二、综述
  • 血管内皮生长因子受体 KDR-抗肿瘤治疗的新靶点
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读硕士学位期间的重要的研究成果
  • 相关论文文献

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