黑色素瘤病人淋巴细胞表面TRAIL表达的意义

论文摘要

背景:黑色素瘤因其具有较强的免疫原性而成为肿瘤免疫研究中的经典模型。在以前的研究中表明:早期黑色素瘤衰退及IFN-α2介导的疗效与CD4F淋巴细胞浸润相关,并发现CD4+T淋巴细胞的杀瘤作用与其表面TRAIL的表达有关。但在后来的实验中发现:新鲜分离的肿瘤细胞对TRAIL诱导的凋亡耐受,并同时表现出对其他化疗药物凋亡诱导的耐受。因此,研究黑色素瘤患者淋巴细胞TRAIL的表达并探讨黑色素瘤细胞对TRAIL耐受的机理显得很重要。 目的:了解黑色素瘤病人淋巴细胞TRAIL的表达对黑色素瘤细胞的作用 方法:利用免疫荧光及流式细胞术检测黑色素瘤患者单核淋巴细胞TRAIL的表达情况,并比较早期与晚期黑色素瘤患者淋巴细胞在IFN-α2或IFN-γ刺激下TRAIL的表达差异。用TRAIL筛选对其凋亡诱导不敏感的黑色素瘤细胞株,检测其TRAIL受体的表达差异,用Western-Blot技术检测caspase-8,caspase-3和caspase-9及p21,p53,p27,Erk1/2,Akt,p-Erk1/2和p-Akt在parental细胞和selected细胞（见方法6）之间的表达差异。用MTT和细胞克隆试验检测两类细胞体内外增殖水平。 结果:与正常对照组相比,黑色素瘤患者淋巴细胞表达较高水平的TRAIL。并发现早期较晚期黑色素瘤患者淋巴细胞在IFN-α2及IFN-γ的刺激下,诱导出较高水平的TRAIL。通过胞内蛋白检测得知:经TRAIL筛选的耐受细胞caspase-8,caspase-3的表达均有降低,与细胞周期相关的p-21,p-53也有降低,而与细胞增殖呈正相关的p-Erk1/2和p-Akt的表达升高,并发现TRAIL筛选的耐受细胞在体内外均具有较高的增殖能力,但未发现与TRAIL介导的信号有关。 结论:黑色素瘤因其具有较强的免疫原性,可活化淋巴细胞高表达TRAIL,黑色素瘤细胞对TRAIL的耐受可能与体内单核淋巴细胞表面TRAIL的筛选有关,经筛

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 一 前言
• 二 材料和方法
• 2.1 细胞与试剂
• 2.2 Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核胞
• 2.3 免疫荧光染色法（双染）
• 2.4 从新鲜外科样本中分离黑色素瘤细胞
• 2.5 FCM检测TRAIL-R表达
• 2.6 细胞的筛选及培养
• 2.7 FCM检测凋亡
• 2.8 Western-Blot
• 2.9 免疫荧光实验检测TRAIL-R2
• 2.10 MTT Assay
• 2.11 细胞克隆试验
• 2.12 动物实验
• 三 结果
• 四 讨论
• 五 结论
• 六 参考文献
• 七 附录
• 八 致谢
• 九 综述
• +CD25⁺调节性T细胞与肿瘤免疫'>CD4⁺CD25⁺调节性T细胞与肿瘤免疫
• 十 发表论文
• Selection for TRAIL Resistance Results in Malignant Cells with High Proliferation Potential