诺西肽高产菌种的选育与提取工艺的研究

论文题目: 诺西肽高产菌种的选育与提取工艺的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 微生物与生化药学

作者: 楼双凤

导师: 何建勇

关键词: 诺西肽,菌种选育,理性化筛选,分离纯化,生物合成

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本论文以诺西肽产生菌-活跃链霉菌Streptomyces actuosus A01为出发菌株，对菌种的选育、产物的提取纯化方法及生物合成与代谢调控的机理进行了研究。首先对出发菌株进行了自然分离，获得了产量较高、生产性能稳定的菌株D-45，发酵单位为2100 ug／ml。对菌株D-45进行了几种不同诱变剂和不同剂量的考察，确定UV 90s是比较合适的诱变条件。在考察诺西肽固体发酵与摇瓶液体发酵相关性的基础上，采用琼脂块固体发酵法代替摇瓶液体发酵法筛选诺西肽高产菌株，显著提高了筛选效率。其次，本论文建立了半胱氨酸、甲胺、蛋氨酸、自身产物耐受的理性化筛选模型，耐受结果表明：由耐受半胱氨酸或耐受甲胺得到菌株中，高产菌株筛得的几率较高，并由此获得了菌株C1-11（发酵单位为2583ug／ml）、S4-20（发酵单位为2499ug／ml）。将这三种耐受模型进行组合，经筛选得到了同时耐受Met、甲胺和Cys的高产突变菌株MSC1-72，该菌株发酵单位高，生产性能稳定，发酵单位达到2961ug／ml。此外，本论文建立了由发酵液分离纯化诺西肽的提取工艺。首次采用了MN-200大孔吸附树脂提取诺西肽，并对诺西肽的结晶工艺条件进行了研究，确定了合适的结晶工艺条件。应用本论文建立的诺西肽分离提取工艺，使产品的总收率达到53％，成品纯度显著提高，成品毫克效价达到852ug／mg。此外还建立了实验室制备诺西肽预混剂的工艺过程，并参照兽药标准对样品进行了检测。本论文还探讨了诺西肽生物合成的前体物一丝氨酸、半胱氨酸来源的可能途径，实验结果表明：参与诺西肽生物合成的丝氨酸可能是由葡萄糖代谢过程中的3-磷酸甘油酸合成而来。

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

1.1 诺西肽产生菌

1.1.1 诺西肽产生菌的发现

1.1.2 产生菌的特征

1.2 诺西肽的化学结构和理化性质

1.3 诺西肽的抗菌作用机制

1.4 诺西肽的生物合成

1.5 抗性和生物合成基因

1.6 诺西肽的检测方法

1.7 诺西肽的菌种选育

1.8 诺西肽提取工艺的研究

1.9 诺西肽的国内外研究进展

实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 菌种

2.1.2 培养基

2.1.3 溶液

2.1.4 试剂

2.1.5 仪器

2.2 实验方法

2.2.1 诺西肽产生菌的菌种选育

2.2.2 诺西肽的含量测定

2.2.3 代谢参数的测定

2.2.4 树脂的处理

2.2.5 诺西肽预混剂的测定

实验结果

Ⅰ.诺西肽高产菌株选育的研究

3.1.1 琼脂块固体发酵筛选法的建立

3.1.2 出发菌株的确定

3.1.3 诱变剂及菌株初始状态的选择

3.1.4 理性化筛选模型的建立

3.1.5 高产菌株的选育系谱

3.1.6 高产菌株特性的考察

Ⅱ 前体与抑制剂对诺西肽生物合成的影响

3.2.1 前体对诺西肽生物合成的影响

3.2.2 抑制剂对诺西肽生物合成的影响

3.2.3 诺西肽生物合成前体Ser生源学的研究

Ⅲ 诺西肽分离纯化工艺的研究

3.3.1 诺西肽提取工艺的研究

3.3.1.1 溶剂提取法提取诺西肽工艺的研究

3.3.1.2 大孔吸附树脂法提取诺西肽工艺的研究

3.3.1.3 样品的重结晶

3.3.1.4 成品质量分析

3.3.1.5 诺西肽总的提取精制流程

3.3.1.6 诺西肽预混剂的质量考察

结论

讨论

参考文献

致谢

发布时间: 2006-12-14

参考文献

[1].诺西肽发酵工艺的研究[D]. 韩果红.沈阳药科大学2004
[2].诺西肽产生菌的菌种选育及发酵代谢研究[D]. 武昕.沈阳药科大学2003
[3].诺西肽分阶段补料分批发酵过程优化研究[D]. 赵天书.东北大学2013
[4].诺西肽产生菌的菌种选育及溶氧条件的改善[D]. 赵丽元.沈阳药科大学2007
[5].vgb基因和bldD基因在活跃链霉菌中的过表达及其对诺西肽产量的研究[D]. 秦汉俊.安徽大学2012

诺西肽高产菌种的选育与提取工艺的研究

猜你喜欢