论文摘要
我国是西瓜的主要生产国之一,其中西北地区为我国重要的优质产区。但在西瓜的生产上受到多种病害的影响,致使西瓜大量减产,部分田块甚至绝收,严重影响了瓜农的种植积极性。据报道,侵染西瓜的病毒主要有:西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV) ,而且在田间病毒会经常发生复合感染。2007年至2008年对陕西省杨凌、礼泉、韩城、扶风、周至和武功6个西瓜种植区的西瓜植株进行调查,观察并记录了西瓜病毒病的发生情况、危害程度以及病害发生规律,调查发现在陕西西瓜病毒病发生普遍,危害严重,而且单一症状少,复合侵染的症状较多。症状类型主要有花叶、皱缩、泡斑、植株矮小、卷叶等,不同地区的典型症状又不尽相同,调查结果如下:(1)所调查的五个地区的发病瓜叶上均出现花叶症状,早期即显症,随着病情的发展和植株的发育,顶部嫩叶逐渐呈现深绿、浅绿相间的斑驳花叶,且有成片发病现象。(2)除扶风以外,其他地区的发病瓜叶上均有疱状突起,不同西瓜品种间泡斑严重程度存在差异。(3)杨凌和周至的发病瓜叶上有不同程度的皱缩畸形,后期叶片坏死。(4)韩城、扶风和周至三地的发病瓜苗出现植株矮小的症状,而且发病植株叶片小,严重的呈蕨叶形或鸡爪状。(5)卷叶发生情况较轻,只在扶风零星发生。为了保证西瓜生产的产量和质量,准确鉴定西瓜病害,在西瓜生产上急需一种较为准确、灵敏、和快速的病害检测方法。本研究针对陕西省西瓜病毒病的发生现状,在利用单重RT-PCR(sRT-PCR)技术检测西瓜病害的基础上,对多重RT-PCR体系各成分及循环参数进行摸索和优化,建立了一种能同时检测ZYMV、WMV、TMV、SqMV和CMV 5种病毒的多重RT-PCR(mRT-PCR)技术体系。首先根据5种病毒的核苷酸保守区序列,设计特异性引物对,然后从影响多重RT-PCR扩增的Taq DNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、退火温度、延伸时间、循环次数等多方面进行优化,成功的在一个体系中对同时被ZYMV、WMV、TMV、SqMV和CMV5种病毒复合侵染的西瓜材料进行多重RT-PCR扩增,得到了542、485、410、354和293bp 5条特异性且大小与试验设计相符合的条带。序列同源性分析验证了多重RT-PCR结果的可靠性。该体系已应用于实际,实现了对侵染西瓜的5种病毒的同时检测,极大的提高了检测效率,降低了检测成本,体现了多重RT-PCR的优越性。
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