普罗布考、厄贝沙坦对胰岛素PI3K/Akt信号转导通路及高血压相关因素影响的实验研究

论文摘要

目的：（1）探讨普罗布考、厄贝沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）血压、内皮功能、胰岛素抵抗、氧化应激及肾脏间质纤维化情况的影响；（2）探讨普罗布考、厄贝沙坦对SHR胰岛素PI3K／Akt信号转导通路蛋白表达的影响；（3）探讨普罗布考、厄贝沙坦对内皮细胞氧化损伤及氧化应激状态下内皮功能及相关因素的影响。方法：（1）第一部分：通过给予普罗布考及厄贝沙坦干预自发性高血压大鼠模型，观察SHR血压、心率变化；用生化方法测定糖代谢指标及血清eNOS、NO、SOD、MDA含量；放免法测定血清胰岛素及血浆AngⅡ水平；双抗体夹心ELISA方法测定血清脂联素和PAI-1的变化；放免法测定肾脏组织AngⅡ水平；HE染色观察肾脏大体病理改变；苦味酸—天狼猩红染色，在偏振光显微镜下计算肾脏间质胶原容积分数；（2）第二部分：用Western Blot方法测定自发性高血压大鼠胰岛素抵抗靶组织肝脏在给予药物干预后PI3K／Akt信号转导通路关键蛋白Akt及其两种磷酸化形式（p-Akt Thr 308，p-Akt Ser473）蛋白表达量的变化；（3）第三部分：用Ⅰ型胶原酶法进行人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养；用免疫组化方法进行内皮细胞鉴定（第Ⅷ因子）；用H2O2制作内皮细胞氧化应激损伤模型；用MTT法检测普罗布考及厄贝沙坦对HUVEC氧化损伤的影响；用生化及ELISA方法检测氧化应激情况下内皮细胞培养液中NO、eNOS、iNOS、SOD、MDA、PAI-1含量。结果：（1）第一部分：1)厄贝沙坦组和联合用药组血压低于SHR对照组；2)OGTT显示普罗布考组及SHR对照组大鼠出现葡萄糖利用障碍；3)厄贝沙坦组和联合用药组血浆AngⅡ及肾脏组织AngⅡ含量低于SHR对照组；4)厄贝沙坦组和联合用药组血清NO、SOD、PAI-1高于SHR对照组；5)普罗布考组、厄贝沙坦组及联合用药组血清eNOS、脂联素水平均高于SHR对照组；6)普罗布考组、厄贝沙坦组及联合用药组血清MDA含量和肾脏间质CVF均低于SHR对照组。（2）第二部分：1)四组SHR及WKY大鼠肝脏Akt相对蛋白含量未见明显差异；2)普罗布考组、厄贝沙坦组及联合用药组大鼠肝脏p-Akt（Thr308）相对蛋白含量均高于SHR对照组，其中联合用药组升高最为明显；3)厄贝沙坦组、联合用药组肝脏p-Akt（Ser473）相对蛋白含量则均高于SHR对照组。（3）第三部分：1)内皮细胞第Ⅷ因子免疫组化鉴定胞浆中可见大量棕色小颗粒，证实细胞为血管内皮细胞。2)MTT：C组、Pro2（5μM）组、Pro3（10μM）组、Irb3（10μM）组、Pro3（10μM）+Irb3（10μM）组吸光度值高于H组；3)C组、Pro1（2．5μM）组、Pro2组（5μM）和Pro3（10μM）组细胞培养液中NO均低于H组；4)C组、Pro2（5μM）组和Pro3（10μM）组培养液中iNOS低于H组；5)C组、Pro2（5μM）组和Pro3（10μM）组培养液中eNOS均高于H组；6)Pro1（2．5μM）组、Pro2（5μM）组和Pro3（10μM）组培养液SOD含量与H组比较无差异；7)C组、Prol（2．5μM）组、Pro2（5μM）组和Pro3（10μM）组培养液MDA含量低于H组；8)C组和Pro3（10μM）组培养液PAI-1含量低于H组；9)C组、Irb2（5μM）组和Irb3（10μM）组培养液NO水平低于H组；10)C组和Irb3（10μM）组培养液中iNOS水平低于H组；11)C组和Irb3（10μM）细胞培养液中eNOS水平高于H组；12)C组、Irb1（2．5μM）组、Irb2（5μM）组和Irb3（10μM）组培养液中SOD、MDA、PAI-1均高于H组；13)与Pro+Irb组比较，C组培养液中NO水平低，H组和Irb（10μM）组较高；14)与Pro+Irb组比较，C组培养液中iNOS水平较低，H组、Pro（10μM）组和Irb（10μM）组较高；15)与Pro+Irb组比较，C组培养液中eNOS水平较高，H组、Irb（10μM）组较低；16)与Pro+Irb组比较，C组培养液中SOD水平均较高，H组、Pro（10μM）组较低；17)与Pro+Irb组比较，H组、Irb（10μM）组培养液中MDA水平较高；18)与Pro+Irb组比较，H组、Pro（10μM）组细胞培养液中PAI-1水平均较高。结论：（1）氧化应激与胰岛素抵抗及内皮功能不良密切相关；普罗布考、厄贝沙坦均可以通过不同机制改善SHR胰岛素抵抗及内皮功能不良；厄贝沙坦改善SHR氧化应激的机制除了抑制NAD（P）H氧化酶活性外，还可能与其直接增加SOD的水平，增加超氧阴离子的灭活有关；虽然单独应用普罗布考不能降低SHR大鼠血压，但是可以与厄贝沙坦发生协同降压作用；厄贝沙坦可降低SHR血压及代谢综合征核心生物标记物PAI-1水平。（2）高血压肾脏损害一个复杂的过程，肾脏RAAS异常及氧化应激可能是引起SHR肾脏损害的原因之一；普罗布考和厄贝沙坦可以通过不同机制延缓SHR肾脏间质纤维化，对SHR肾脏具有一定的保护作用。（3）胰岛素PI3K／Akt信号途径在糖代谢靶组织介导糖原合成、葡萄糖转运等重要代谢过程；在内皮细胞介导NO产生，维持血管内皮的正常功能。胰岛素PI3K／Akt信号转导通路中Akt蛋白Thr308位点的磷酸化受损可能是导致SHR胰岛素抵抗的原因之一；普罗布考和厄贝沙坦改善SHR胰岛素抵抗的作用或许与其增加Akt Thr308位点的磷酸化水平有关。（4）氧自由基可以造成HUVEC结构及功能的损伤。普罗布考和厄贝沙坦可通过不同机制减轻氧化应激对HUVEC的影响，从而对血管内皮细胞产生保护作用。一定浓度的普罗布考和厄贝沙坦可以改善氧化应激对HUVEC PI3K／Akt／eNOS信号途径的损伤。另外，氧化应激可引起HUVEC培养液中PAI-1水平升高；普罗布考和厄贝沙坦可能在改善氧化应激引起的PAI-1水平升高方面存在一定的协同作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 研究成果、现状
• 研究目的、方法
• 第一部分 普罗布考、厄贝沙坦对自发性高血压大鼠血压、内皮功能、胰岛素抵抗、氧化应激及相关因素影响的实验研究
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第二部分 普罗布考、厄贝沙坦对自发性高血压大鼠胰岛素PI3K/AKT信号转导通路影响的实验研究
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三部分 普罗布考、厄贝沙坦对人脐静脉内皮细胞内皮功能、氧化应激损伤及相关因素影响的实验研究
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 胰岛素抵抗和内皮功能不良相互作用进展
• 综述参考文献
• 致谢