论文摘要
目的：在过去的研究工作中，我们建立了一套适合大量微生物的筛选，发酵，代谢物的提取，分离方法，并对我国边远地区收集的土壤微生物进行了筛选。以Vero（非洲绿猴肾细胞）细胞为正常对照细胞，以K562细胞为靶细胞筛选对正常细胞／肿瘤细胞具有选择性抑制作用的代谢物，通过筛选发现，放线菌（Streptomyces sp．3423）的代谢产物提取物对K562细胞具有抑制活性(IC50=25.12μl／ml)，但对Vero细胞呈弱抑制活性，具有选择性抑制作用。放线菌（Streptomyces sp．2215）的代谢产物提取物对格列卫耐药K562／Glc细胞具有抑制作用(IC50=18.04μl／ml)，且对Vero细胞呈弱抑制活性，具有选择性抑制作用。从筛选结果得知，这两株放线菌代谢产物中均含有抗肿瘤成分，但具体的化合物未知，本文对其进行了分离纯化及结构鉴定，并对分离得到的化合物进行了体外抗肿瘤活性及抗肿瘤机制的相关研究，以期发现抗肿瘤先导化合物。方法：放线菌（Streptomyces sp．3423）和放线菌（Streptomyces sp．2215）分别采用摇瓶和发酵罐发酵的方法进行菌种大规模发酵，发酵液采用溶剂提取法进行有效成分的提取，提取物采用正相硅胶柱色谱，反相C18柱色谱，Sephadex LH-20，制备TLC，HPLC等系统分离的手段进行分离得到单体化合物，化合物采用IR，FAB-MS，1H-NMR，13C-NMR，1H-1HCOSY，HSQC，HMBC等手段进行结构鉴定。分离得到的化合物采用MTT法进行体外K562细胞抑制活性测定，Western-blot法检测化合物对BCR-ABL蛋白表达的抑制作用。结果：从3423#放线菌中分离得到6个已知化合物，其中五个为环二肽类物质，经鉴定分别为：1：（Z，Z）6-亚异丁基-3-苯亚甲基-1-N-甲基-哌嗪-2，5-二酮，2：3-苄基-6异丁基--哌嗪-2，5-二酮，3：：（Z）3-苯亚甲基-6异丁基--哌嗪-2，5-二酮，4：（Z）3-苄基-6亚异丁基--哌嗪-2，5-二酮，5：（Z，Z）6-亚异丁基-3-苯亚甲基-哌嗪-2，5-二酮（白诺菌素），6：6-甲基-3-羟基-5-甲氧基-2.3-二氢吡喃-4酮；从2215#放线菌中分离得到3个已知化合物，其中两个为醌霉素类物质，一个为脂肪酸类物质，经鉴定结构分别为：7：monosulfoxide quinomycine，8：quinomycine A，9：十六烷酸；生物学研究表明，化合物1，5，7，8均对K562细胞具有抑制活性，其IC50值分别为13.8μg／ml，4.05μg／ml，34.01ng／ml，0.015ng／ml，Western-blot结果表明，化合物5，7，8对BCR-ABL融合蛋白的表达有抑制作用，化合物对K562细胞的抑制活性及作用机制均未见报道。