论文摘要
一、IPF和非IPF患者肺成纤维细胞表面Thy-1的表达及在TGF-β刺激下的表达差异目的:建立肺成纤维细胞的培养方法,为肺纤维化的发病机制和治疗措施体外研究提供细胞技术平台;探索IPF和非IPF患者肺成纤维细胞株的亚群差异。方法:采用肺组织块接种培养法,培养的细胞通过相差显微镜和透射电镜观察形态、免疫细胞化学染色检测细胞表型标记蛋白等进行鉴定,流式细胞术检测各种情况下表面Thy-1的阳性率,并用流式分选系统（FACS）分选出Thy-1（-）细胞。结果:培养的IPF患者成纤维细胞株细胞呈梭形,单个核,多突起,有伪足,边缘清晰整齐,贴壁生长,表达波形蛋白（vimentin）和平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,不表达角蛋白（cytokeratin）和结蛋白（desmin）。电镜观察到胞质中有丝状a-SMA纤维。IPF成纤维细胞株的表面抗原Thy-1阳性率明显低于正常成纤维细胞株,并分成明显的Thy-1阳性和阴性两个亚群。TGF-β刺激后IPF成纤维细胞株的Thy-1的阳性率降低比正常细胞株明显。结论:原代培养的IPF患者成纤维细胞株细胞含有肌成纤维细胞（MyoF）并且可以传代,可分选出Thy（-）细胞,为后续实验提供了基础。成纤维细胞表面抗原Thy-1的阳性率在纤维化肺组织和正常肺组织是有显著差异的,经TGF-β刺激后其差异更加明显。二、表观遗传药物5-氮杂胞苷、丙戊酸钠对肺成纤维细胞增殖及分化的影响目的:探索表观遗传药物对IPF患者肺成纤维细胞株的干预影响,以期为肺纤维化的治疗提供一个新的选择。方法:用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷和组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠处理IPF患者肺成纤维细胞株,地塞米松为对照。用噻唑兰MTT细胞增殖实验定量检测细胞株的增殖和药物的细胞毒性情况。分别应用流式细胞技术、免疫细胞化学法观察各药刺激前后该细胞株表面Thy-1表达的变化和细胞平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达差异。结果:IPF患者肺成纤维细胞株在DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷处理24小时后可明显抑制增殖,5μmol/l作用48小时后表面抗原Thy-1的阳性率上升为93.7%±1.95%,5μmol/l处理5天后α-SMA的阳性率下降为49.2%±6.4%（p＜0.05）。在丙戊酸钠处理24小时后显著抑制增殖,10 mg/ml作用48小时后表面抗原Thy-1的阳性率上升为95.5%±2.21%,10 mg/ml处理5天后α-SMA的阳性率下降为36.6%±6.9%（p＜0.05）。地塞米松虽然可明显抑制IPF患者肺成纤维细胞株的增殖,5μmol/l剂量作用24小时后表面抗原Thy-1的阳性率上升为87.7%±1.46%,但在5μmol/l剂量作用5天后α-SMA的阳性率为86.3%±4.9%（p＞0.05）。结论:表观遗传药物DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂胞苷和组蛋白乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠能够抑制IPF患者肺成纤维细胞株的增殖,在相应的亚细胞毒性剂量上可导致细胞表面抗原Thy-1的表观上调,使肌成纤维细胞的特征标记物平滑肌肌动蛋白α-SMA表达降低。在肺纤维化的治疗中具有应用前景。
论文目录
相关论文文献
- [1].Thy-1在肺纤维化形成中的作用[J]. 临床内科杂志 2019(11)
- [2].腺病毒介导的白介素10基因体外转导大鼠β_2m-/Thy-1~+骨髓源性肝干细胞[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2008(01)
- [3].长期中等强度运动训练及依那普利对Thy-1肾炎慢性肾功能衰竭大鼠模型肾功能的影响[J]. 中国康复理论与实践 2009(06)
- [4].芬戈莫德干预大鼠抗Thy-1系膜增生性肾炎的研究[J]. 中国医院药学杂志 2012(04)
- [5].thy-1与c-kit在肝癌中的表达与其分化程度的关系[J]. 第三军医大学学报 2011(02)
- [6].补肾益寿片对Thy-1系膜增生性肾炎大鼠肾功能及TGF-β1表达的影响[J]. 中南药学 2011(03)
- [7].Thy-1及Thy-1mRNA在肺纤维化大鼠肺组织中的表达及相关性研究[J]. 中国病理生理杂志 2009(08)
- [8].时钟基因DBP在抗Thy-1肾炎模型肾小球中的变化规律[J]. 解放军医学院学报 2016(09)
- [9].人羊水间充质干细胞的分离鉴定及其对抗Thy-1肾炎的治疗作用[J]. 中华肾病研究电子杂志 2020(04)
- [10].筛选鉴定Thy-1标记阳性肝癌细胞系中的卵圆细胞样干细胞:可能是肝肿瘤干细胞吗?[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2010(10)
- [11].Thy-1表达水平对肺腺癌细胞A549迁移性及部分相关基因表达的影响[J]. 解剖学报 2009(01)
- [12].肿瘤相关成纤维细胞激活Thy-1调控胃癌细胞发生间质转化及迁移能力的研究[J]. 中国免疫学杂志 2018(07)
- [13].丹参注射液对抗Thy-1系膜增生性肾炎模型大鼠TNF-α、IV-C水平的影响[J]. 中成药 2009(10)
- [14].眼镜蛇毒因子耗竭补体对大鼠Thy-1肾炎凋亡病变及其Gadd45α基因表达的影响[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2008(02)
- [15].大鼠Thy-1肾炎增殖病变及sublytic C5b-9致其肾小球系膜细胞增生的实验研究[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2012(10)
- [16].Thy-1肿瘤标记物在肝癌的表达及意义研究[J]. 医学与哲学(临床决策论坛版) 2009(05)
- [17].Thy-1在特发性肺纤维化发病机制中的作用[J]. 山东医药 2008(25)
- [18].Thy-1通过调控Notch1通路促进肝癌细胞EMT进程[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2019(11)
- [19].糖尿病肾病合并抗Thy-1肾炎模型构建及p27~(kip1)的变化[J]. 中国中西医结合肾病杂志 2015(11)
- [20].沉默GCN5或SOX9基因对Thy-1肾炎大鼠肾组织中TGF-β1生成的影响[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2020(03)
- [21].bFGF对在大鼠系膜细胞和抗Thy-1肾炎SDH表达的影响[J]. 辽宁医学院学报 2013(03)
- [22].1,25(OH)_2D_3对Thy-1肾炎大鼠Ki67、mTOR表达的影响[J]. 天津医药 2015(10)
- [23].bFGF对SDH在原代大鼠系膜细胞及大鼠Thy-1肾炎中表达的影响[J]. 辽宁医学院学报 2014(03)