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斑蝥质量分析与毒性研究

2020-12-12阅读(556)

斑蝥质量分析与毒性研究

论文摘要

斑蝥Mylabris为芫菁科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus的干燥体。始载于《神农本草经》,具有破血消癓,功毒蚀疮,引赤发泡的功效。由于其毒性大,中医临床内服均需炮制后入药。本研究以提高斑蝥临床用药安全性、有效性和可控性为目的,对斑蝥及其炮制品的质量、毒性以及成分活性进行了较深入的探讨,主要内容和结果如下：一、不同产地斑蝥及其炮制品中斑蝥素的含量分析1.建立了斑蝥中主成分斑蝥素的HPLC定量方法,比较了不同产地、不同品种、不同部位斑蝥饮片中斑蝥素的含量。结果表明：5个产地药材斑蝥素含量0.90%～1.17%,平均含量为1.01%；斑蝥品种间含量差异不明显；斑蝥素主要集中在斑蝥胸腹部,头足翅部位很少；斑蝥炮制后斑蝥素含量降低。2.改进了斑蝥素提取工艺,结果表明：采用氯仿加盐酸提取得到的总斑蝥素含量为单独用氯仿提取得到的游离斑蝥素含量的1.85倍,提示总斑蝥素含量更能反应出药材内在的毒效与质量。二、斑蝥油脂活性研究及成分分析1.抗肿瘤活性研究对斑蝥石油醚部位进行体内外抗肿瘤活性研究,结果表明：斑蝥油脂对人肝癌细胞（SMMC-7721. HepG2）有明显的增殖抑制作用,IC50分别为0.25、1.72,接近阳性药5-Fu。在体内与化药（CTD）合用,对H22荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤作用,抑瘤率达到74.81%,且呈现一定的剂量依赖性。2.油脂组成分析运用GC-MS对斑蝥石油醚部位的成分进行了定性分析,结果显示：共分离鉴定出10种脂肪酸成分,其中饱和脂肪酸7种,占33%,分别为：肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、山嵛酸。不饱和脂肪酸3种,占67%,分别为：棕榈油酸、油酸、亚油酸。3.多脂肪酸成分的GC含量测定以棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸为指标性成分,同时测定了斑蝥饮片炮制前后这7种脂肪酸成分的含量。结果显示：7种脂肪酸含量存在一定产地差异性,炮制对成分种类和含量没有影响。含量测定方法准确、可靠,为建立斑蝥多指标含量测定方法提供依据。三、毒性研究1.豚鼠皮肤刺激性实验以发泡时间、发泡率、发泡大小为指标,观察斑蝥炮制前后对豚鼠皮肤的毒性反应。结果表明：斑蝥炮制后毒性降低,但仍存在皮肤毒性,斑蝥素引起豚鼠皮肤发泡的最低剂量为20μg。2.小鼠急性毒性实验以LD50值及病理切片为指标,评价斑蝥炮制前后的毒性大小。结果显示：小鼠灌胃给药,生斑蝥LD50=112.79mg/kg,米斑蝥LD50=180.67mg/kg,表明斑蝥炮制后,毒性降低。3.小鼠亚急性毒性实验以血清生化及病理切片为指标,观察斑蝥不同剂量下对肝、肾的毒性表现,探索中毒机理及毒性与斑蝥素含量的相关性。实验结果显示：斑蝥在大剂量下小鼠连续灌胃给药2周,对肾脏产生明显毒性,且对免疫系统造成抑制与损伤,在小剂量下小鼠连续灌胃给药4周,未表现出明显毒性。提示药典所设剂量是安全的,临床使用中,严格控制斑蝥的用法用量,可避免毒性反应的发生。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 第一章 文献综述
  • 第一节 斑蝥的化学成分、药理作用、炮制工艺研究进展
  • 第二节 斑蝥的质量标准研究进展
  • 第三节 斑蝥的毒性研究进展
  • 参考文献
  • 第二章 斑蝥饮片含量测定研究
  • 第一节 不同产地斑蝥及其炮制品的含量测定
  • 1. 仪器与试药
  • 2. 方法与结果
  • 3. 讨论
  • 4. 小结
  • 参考文献
  • 第二节 斑蝥中斑蝥素存在形态研究
  • 1. 仪器与试药
  • 2. 方法与结果
  • 3. 讨论
  • 4. 小结
  • 参考文献
  • 第三章 斑蝥油脂的活性研究及成分分析
  • 第一节 斑蝥油脂体外抗肿瘤活性实验
  • 1. 材料
  • 2. 实验方法
  • 3. 实验结果
  • 4、讨论与小结
  • 参考文献
  • 第二节 斑蝥油脂体内抗肿瘤活性实验
  • 1. 材料
  • 2. 实验方法
  • 3. 实验结果
  • 4. 讨论与小结
  • 参考文献
  • 第三节 斑蝥油脂中脂肪酸成分的GC-MS分析
  • 1. 仪器与试药
  • 2. 方法与结果
  • 3. 讨论
  • 4. 小结
  • 参考文献
  • 第四节 斑蝥油脂中脂肪酸成分的GC含量测定
  • 1. 仪器与试药
  • 2. 方法与结果
  • 3. 讨论
  • 4. 小结
  • 第四章 斑蝥毒性研究
  • 第一节 皮肤刺激性实验
  • 1. 材料
  • 2. 实验方法
  • 3. 讨论与小结
  • 参考文献
  • 第二节 性毒性实验
  • 1. 材料
  • 2. 实验方法
  • 3. 实验结果
  • 4. 讨论与小结
  • 参考文献
  • 第三节 急性毒性实验
  • 1. 材料
  • 2. 实验方法
  • 3. 实验结果
  • 4. 讨论与小结
  • 参考文献
  • 第五章 斑蝥及米斑蝥质量标准（草案）
  • 结语
  • 创新点
  • 附图
  • 攻读硕士学位期间取得的学术成果
  • 致谢

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