利用化学发光及共振光散射技术分析DNA及其突变的研究

论文摘要

核酸是重要的生命大分子,核酸的分析在生命科学研究中具有重要的意义。核酸特殊序列及单碱基多态性（SNP）的检测,在临床诊断,病理分析等方面都有很重要的作用。随着生命科学的迅速发展,已有方法如放射性标记、酶标法等的局限性已日益显露出来,所以研究普遍适用性好、操作简便、灵敏度高的DNA杂交检测新方法显得越来越迫切。滚环扩增（RCA）是新近发展起来的一种恒温核酸扩增方法。这种方法可以直接扩增DNA和RNA,实现对靶核酸的信号放大,取得核酸分析的高灵敏度,因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。本文用高灵敏度的化学发光技术研究了滚环扩增在DNA杂交检测中的应用。在固相体系中,通过杂交反应生成三明治复合体,待测靶序列通过滚环扩增反应进行信号的放大。通过化学发光检测固相体系的发光信号与待测靶序列的寡聚核苷酸浓度成正比。该法得出化学发光强度与DNA靶分子浓度在10 pmol L-1-1 nmol L-1范围内呈良好的线性关系。同时,我们还利用高灵敏化学发光成像技术研究了滚环扩增在SNP检测中的应用。在扩增反应中,恒温DNA连接酶起到关键的作用。扩增模板在恒温DNA连接酶的作用下,可以在完全匹配链的末端成环,进行滚环扩增反应,而对于单碱基错配链,扩增模板则不能与之成环,滚环扩增不能进行,只产生微弱的发光信号。结合高灵敏度的增强化学发光体系,利用化学发光成像技术便可进行SNP的检测,可以灵敏的分辨1 nmolL-完全匹配链和单碱基错配链,为SNP分析开辟了一条新的途径。本文还建立了一种测定微量磷的共振光散射分析新方法。在0.25 mol L-1的硫酸介质中,PO43-与（NH4）2MoO4形成磷钼杂多酸,再与甲基绿相互作用导致共振光散射（RLS）信号在200-700 nm之间有很大的增强,并且在367 nm处散射值达到最大。基于此现象,建立了一种灵敏的检测磷的方法。测定磷的标准曲线的线性范围是0.1-200 ngmL-1,检出限是0.04 ng mL-1。由于RCA反应能产生大量的焦磷酸,将其水解为PO43-后再利用RLS检测,可能为基于RCA的核酸分析开辟一条新的途径。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 引言
• 1.1 核酸探针分析概述
• 1.2 滚环扩增技术在DNA杂交分析中的应用
• 1.3 化学发光技术在分析中的应用
• 第2章 AP-AMPPD化学发光体系检测寡聚核苷酸探针研究
• 2.1 前言
• 2.2 实验部分
• 2.3 结果与讨论
• 2.4 结论
• 2O₂-PIP化学发光成像系统检测寡聚核苷酸探针研究'>第3章 HRP-luminol-H₂O₂-PIP化学发光成像系统检测寡聚核苷酸探针研究
• 3.1 前言
• 3.2 实验部分
• 3.3 结果与讨论
• 3.4 结论
• 第4章 磷钼杂多酸-甲基绿体系中磷的共振光散射分析
• 4.1 前言
• 4.2 实验部分
• 4.3 结果与讨论
• 4.4 结论
• 参考文献
• 硕士期间发表论文情况
• 致谢