对虾白斑综合症病毒膜蛋白VP33的功能研究和非结构蛋白wsv406的初步鉴定

论文摘要

对虾白斑综合症病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是危害全球对虾养殖业的主要病毒病原之一。它是一种具有囊膜的、无包涵体的、类杆状双链环状DNA病毒,具有传染力强,致死率高,难防治的特点。由于其宿主范围广泛,能够侵染多种甲壳纲动物,对养殖业和海洋环境都构成了严重威胁。本论文主要针对病毒结构蛋白开展研究。这有利于揭示病毒复制过程中的组装机制,从而为最终建立有效的防治方法提供有力的科学依据。研究工作主要分为两部分:（1）膜蛋白VP33的鉴定。之前的研究通过对完整病毒的结构蛋白进行SDS-PAGE电泳和质谱鉴定后,结合氨基酸序列比对分析,已确定VP33为WSSV基因组中ORF wsv254编码的膜蛋白。本文分别在E.coli XL1-Blue和E:coliBL21（DE3）中表达纯化了带6×His和GST表达标签的重组VP33蛋白,并收集纯化所得的融合蛋白（（His）6-VP33）复性后注射小鼠获得特异性多克隆抗体。之后,利用GST pull-down分析和Far-Western印迹分析法证明了VP33与自身以及另一个主要膜蛋白VP24之间存在特异性的相互作用。（2）通过对WSSV全基因组的测序分析,我们获得了ORF wsv406的DNA序列。本文将wsv406全序列基因克隆至载体pGEX-2TH,并在E.coli BL21（DE3）中进行表达,得到以包涵体形式存在的不溶性融合蛋白。纯化收集后经包涵体复性得活性蛋白,注射小鼠获特异性多克隆抗体。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 对虾白斑综合症病毒（WSSV）及其分子生物学研究
• 1.1 对虾白斑综合症病毒研究概况
• 1.1.1 对虾白斑综合症病毒的发现和命名
• 1.1.2 对虾白斑综合症病毒的形态结构及理化特性
• 1.1.3 对虾白斑综合症病毒的组织病理学特征及感染过程
• 1.1.4 对虾白斑综合症病毒的传播途径
• 1.1.5 对虾白斑综合症病毒的分离纯化
• 1.2 对虾白斑综合症病毒的分子生物学研究进展
• 1.2.1 对虾白斑综合症病毒的基因组学研究
• 1.2.2 对虾白斑综合症病毒的蛋白质组学研究
• 第一部分 对虾白斑综合症病毒膜蛋白VP33基因的功能研究
• 1 本次实验的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 WSSV完整病毒和核衣壳的制备
• 2.2.2 基因的克隆表达和蛋白质纯化
• 2.2.3 多克隆抗体的制备
• 2.2.4 Western blot分析
• 2.2.5 Far-Western分析
• 2.2.6 GST pull-down分析
• 3 结果
• 3.1 vp33基因的结构
• 6-VP33和GST-VP33的诱导表达和纯化'>3.2（His）₆-VP33和GST-VP33的诱导表达和纯化
• 3.3 Western blot分析
• 3.4 VP33与自身以及VP24之间的相互作用
• 4 讨论
• 第二部分 非结构蛋白wsv406的初步鉴定
• 1 本实验的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.2.1 pGEX-2TH-wsv406重组表达质粒的构建
• 2.2.2 GST-wsv406在E.coli BL-21中的表达
• 2.2.3 Ni-NTA柱变性条件下纯化重组蛋白及蛋白复性
• 2.2.4 多克隆抗体的制备
• 2.2.5 Western blot分析
• 3 结果
• 3.1 wsv406基因的结构
• 3.2 pGEX-2TH-wsv406在E.coli BL-21中的诱导表达和纯化
• 4 讨论
• 参考文献
• 缩略词
• 附录
• 致谢