出血性大肠杆菌O157 eae基因的克隆、表达及免疫学特性研究

论文题目: 出血性大肠杆菌O157 eae基因的克隆、表达及免疫学特性研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 预防兽医学

作者: 陈萍

导师: 郑明光

关键词: 紧密素,融合蛋白,基因工程菌,疫苗

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本研究设计构建了以eae 基因编码的紧密素和志贺毒素B 亚基StxB 作为保护性抗原的融合蛋白和基因工程菌,并进行免疫学特性研究。首先,利用分子生物学技术克隆了出血性大肠杆菌eae 基因的C 端280 个氨基酸残基(Int280)基因部分与stx1/2B 构建了eae-stx1/2B 融合基因,通过原核表达,获得Eae-Stx1/2B 融合蛋白。其次,运用PCR 技术扩增eae 全基因,构建了O157Δler/ stx(pBR322::stx1/2B::eae)基因工程菌并进行生物学特性分析。第三,进行上述融合蛋白和基因工程菌的免疫保护实验。通过不同的免疫途径研究融合蛋白和基因工程菌株免疫接种动物抗体消长规律,从免疫后血清IgG抗体效价、粪便IgA 抗体效价、攻毒小鼠存活率、排菌数量和时间及体重变化等指标综合评价其对EHEC O157:H7 感染的保护作用。实验结果显示两个主要保护性抗原Eae 和StxB 共同构建的融合蛋白和基因工程菌对EHEC O157:H7 感染具有保护作用。O157Δler/ stx(pBR322::stx1/2B::eae)基因工程菌通过灌胃免疫可刺激小鼠产生特异性的抗EHEC 血清IgG 抗体和粪便IgA 抗体,能迅速清除肠道内感染的EHEC O157:H7 细菌,安全性好,免疫原性强,是极有价值的基因工程疫苗候选株。

论文目录:

前言

第一篇 文献综述

第一章 EHEC 0157 感染、致病机理及主要毒力因子

第二章 志贺毒素的研究进展

第三章 eae 基因及其编码的紧密素的研究进展

第四章 EHEC 0157 疫苗的研究进展

第二篇 实验研究

第一章 出血性大肠杆菌eae-stx1/28 融合基因的构建和表达

1 材料与方法

2 结果

2.1 eae Int280 基因的PCR 扩增与克隆

2.2 pET28::eae-stx1/28 融合基因表达载体的构建

2 3 Eae-Stx1/28 融合蛋白的表达

2 4 免疫印迹结果

3 讨论

4 小结

第二章 EHEC O157Δler/ stx(pBR322::stx 1/2B::eae)基因工程菌的构建与生物学特性分析

1 材料与方法

2 结果

2.1 EHEC 0157Δler/ stx(pBR322::stx 1/28::eae)的构建

2.2 Vero 细胞毒性实验

2.3 体外表达检测

2.4 HEp-2 细胞粘附实验

2.5 肠道稳定性和安全性

3 讨论

4 小结

第三章 Eae-stx1/28 融合蛋白免疫学特性的实验研究

1 材料与方法

2 结果

2.1 包涵体的制备与纯化

2.2 Eae-Stx1/28 融合蛋白抗血清对EHEC 粘附上皮细胞的的影响

2.3 EHEC EDL933 对普通级昆明鼠感染实验

2.4 Eae-stxB 融合蛋白诱导小鼠产生抗体消长规律

2.5 动物保护力测定结果

3 讨论

4 小结

第四章 EHEC O157Δler/ stx(pBR322::stx 1/2B::eae)对小鼠免疫保护作用的实验研究

1 材料与方法

2 结果

2.1 EHEC O157Δler/ stx(pBR322::stx 1/2B::eae)免疫小鼠抗体消长规律

2.2 排菌情况

2.3 攻毒后体重变化

2.4 存活率

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

附录

攻读博士学位期间主要成果

中文摘要

英文摘要

导师简介

CURRICULUM VITAE

致谢

发布时间: 2005-08-26

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标签：紧密素论文;  融合蛋白论文;  基因工程菌论文;  疫苗论文;