论文摘要
蜂胶中含有丰富的多酚类物质,具有多种生理活性功能,其中抗氧化是其最主要的功能之一,研究蜂胶中的活性成分及其功能活性具有重大意义。为此,本论文重点研究了中国蜂胶样品中多酚类成分的鉴定及含量分析,通过化学方法和细胞模型测定了不同溶剂的蜂胶提取物抗氧化能力,并比较了不同方法之间的差异及蜂胶抗氧化能力与其活性成分之间的关系。从中国各地收集的85个蜂胶样品作为原料,用75%乙醇对其进行提取,利用HPLC对各蜂胶样品的提取物成分进行初步定性和定量分析,实验结果表明,从85种蜂胶提取物中鉴定出24种多酚类化合物及其衍生物,分别是3,4-二羟基苯甲醛、咖啡酸、香兰素、p-香豆酸、阿魏酸、苯甲酸、异阿魏酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、肉桂酸、5-甲氧基短叶松素、短叶松素、山奈酚、山姜素、芹菜素、亚桂皮乙酸、异鼠李素、松属素、短叶松素-3-乙酸酯、柯因、高良姜素、咖啡酸苯乙酯、球松素、柚木柯因、肉桂酸肉桂酯。此外本实验采用HPLC-ESI-Q-TOF MS法,结合标准品的HPLC的保留时间和UV光谱,进一步鉴定并确认了在中国蜂胶中以前很少报道的6种成分,分别是：5-甲氧基短叶松素、短叶松素、山姜素、短叶松素-3-乙酸酯、肉桂酸肉桂酯、亚桂皮乙酸。蜂胶样品的组成成分及含量的结果表明,不同地区的蜂胶含有的总黄酮和总酚酸是不同的,湖南地区的总多酚含量是最高的,达到了319.77mg/g原胶。从黄酮成分上来看,短叶松素-3-乙酸酯、松属素、柯因、短叶松素、高良姜素、5-甲氧基短叶松素这6种黄酮含量最高,而且大多蜂胶样品中都含有这6种黄酮；酚酸及酯类物质中含量较高的有4种成分,分别为咖啡酸苯乙酯、P-香豆酸、咖啡酸、异阿魏酸。按组成成分及含量将蜂胶样品初步分为5类,其中A类蜂胶的总多酚含量最高为184.74 mg/g原胶；E类蜂胶的总多酚含量最低,只有76.98 mg/g原胶。蜂胶样品经水、75%乙醇、石油醚、乙醚、乙酸乙酯这5种溶剂提取后,采用ORAC法和超氧阴离子清除能力测定这两种方法,评估各提取物的抗氧化能力。蜂胶不同溶剂提取物的抗氧化能力从强到弱依次为：75%乙醇提取物>乙醚提取物、乙酸乙酯提取物>水提物、石油醚提取物。因此为了获得高抗氧化活性蜂胶,最好用75%乙醇进行提取。从蜂胶分类上来看,抗氧化能力从强到弱依次为：A类>B、C、D类>E类。相关性分析显示,蜂胶的抗氧化能力与总多酚类物质呈正相关,除个别样品外,蜂胶样品中总多酚含量越高,其抗氧化能力越强。采用流式细胞仪、荧光酶标仪和荧光倒置显微镜研究蜂胶的抗氧化活性,首先建立细胞模型研究蜂胶抗氧化能力的方法,之后测定蜂胶的抗氧化能力。结果显示,在细胞水平上,所有的蜂胶样品都表现出一定的抗氧化能力。其中黑龙江宝清的蜂胶样品抗氧化能力是最强的。