本文主要研究内容
作者包世俊,丁小琴,邢小勇,薛慧文,伏小平,武小椿,温峰琴（2019）在《滑液支原体WVU1853株pdhA、pdhB的原核共表达及表达产物酶活性分析》一文中研究指出：滑液支原体(Mycoplasma synoviae, MS)是禽类重要的致病性支原体,MS感染可引起鸡(Gallus gallus)和火鸡(Meleagris gallopavo)的呼吸道病症以及关节炎和关节滑膜炎,导致蛋鸡产蛋量及鸡蛋品质下降、种蛋孵化率降低、肉鸡生长发育迟缓、饲料转化率低、胴体废弃率高等,给养鸡业造成重大经济损失。对滑液支原体的快速检测方法及良好免疫制剂的研究,可为其感染的快速诊断和有效预防提供支持。基于此,本研究参照GenBank中MS WVU1853株(GenBank No. CP011096.1)丙酮酸脱氢酶E1α亚基基因(pyruvate dehydrogenase E1αsubunit gene, pdhA)和β亚基基因(pdhB)序列及结构设计引物,应用PCR技术分别扩增获得二者及其以单碱基重叠方式连接的自然序列AB,采用overlap-PCR技术完成基因优化,将pdhA与pdhB以及AB分别克隆入原核表达载体pETduet-1和pET-28a(+),成功构建原核共表达质粒pETDuet-AB和pET-AB;并在分别转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)后经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)诱导表达,表达产物纯化后应用SDS-PAGE分析,进而检测其酶促活性。SDS-PAGE结果表明,MS WVU1853株pdhA和pdhB基因在两种质粒转化的大肠杆菌中均获表达,且表达产物相对分子量分别为43和36 kD,但pET-AB转化菌中两种蛋白均高效表达,而pETDuet-AB转化菌中α亚基表达效率明显较低;酶活性检测结果表明,两种转化菌诱导表达产物均具有酶促活性。本研究基于单核苷酸重叠构建了MSpdhA和pdhB基因的共表达载体并在大肠杆菌中获得高效表达,为pdhA和pdhB生物学功能的研究提供了良好的材料,为MS诊断方法的建立提供了可能的标识物,也为MS感染相关免疫制剂的研发提供了可能的疫苗候选,为两个基因的共表达提供了新的思路。
Abstract
hua ye zhi yuan ti (Mycoplasma synoviae, MS)shi qin lei chong yao de zhi bing xing zhi yuan ti ,MSgan ran ke yin qi ji (Gallus gallus)he huo ji (Meleagris gallopavo)de hu xi dao bing zheng yi ji guan jie yan he guan jie hua mo yan ,dao zhi dan ji chan dan liang ji ji dan pin zhi xia jiang 、chong dan fu hua lv jiang di 、rou ji sheng chang fa yo chi huan 、si liao zhuai hua lv di 、dong ti fei qi lv gao deng ,gei yang ji ye zao cheng chong da jing ji sun shi 。dui hua ye zhi yuan ti de kuai su jian ce fang fa ji liang hao mian yi zhi ji de yan jiu ,ke wei ji gan ran de kuai su zhen duan he you xiao yu fang di gong zhi chi 。ji yu ci ,ben yan jiu can zhao GenBankzhong MS WVU1853zhu (GenBank No. CP011096.1)bing tong suan tuo qing mei E1αya ji ji yin (pyruvate dehydrogenase E1αsubunit gene, pdhA)he βya ji ji yin (pdhB)xu lie ji jie gou she ji yin wu ,ying yong PCRji shu fen bie kuo zeng huo de er zhe ji ji yi chan jian ji chong die fang shi lian jie de zi ran xu lie AB,cai yong overlap-PCRji shu wan cheng ji yin you hua ,jiang pdhAyu pdhByi ji ABfen bie ke long ru yuan he biao da zai ti pETduet-1he pET-28a(+),cheng gong gou jian yuan he gong biao da zhi li pETDuet-ABhe pET-AB;bing zai fen bie zhuai hua da chang gan jun (Escherichia coli) BL21 (DE3)hou jing yi bing ji liu dai ban ru tang gan (isopropylβ-D-thiogalactoside, IPTG)you dao biao da ,biao da chan wu chun hua hou ying yong SDS-PAGEfen xi ,jin er jian ce ji mei cu huo xing 。SDS-PAGEjie guo biao ming ,MS WVU1853zhu pdhAhe pdhBji yin zai liang chong zhi li zhuai hua de da chang gan jun zhong jun huo biao da ,ju biao da chan wu xiang dui fen zi liang fen bie wei 43he 36 kD,dan pET-ABzhuai hua jun zhong liang chong dan bai jun gao xiao biao da ,er pETDuet-ABzhuai hua jun zhong αya ji biao da xiao lv ming xian jiao di ;mei huo xing jian ce jie guo biao ming ,liang chong zhuai hua jun you dao biao da chan wu jun ju you mei cu huo xing 。ben yan jiu ji yu chan he gan suan chong die gou jian le MSpdhAhe pdhBji yin de gong biao da zai ti bing zai da chang gan jun zhong huo de gao xiao biao da ,wei pdhAhe pdhBsheng wu xue gong neng de yan jiu di gong le liang hao de cai liao ,wei MSzhen duan fang fa de jian li di gong le ke neng de biao shi wu ,ye wei MSgan ran xiang guan mian yi zhi ji de yan fa di gong le ke neng de yi miao hou shua ,wei liang ge ji yin de gong biao da di gong le xin de sai lu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自农业生物技术学报的包世俊,丁小琴,邢小勇,薛慧文,伏小平,武小椿,温峰琴，发表于刊物农业生物技术学报2019年09期论文，是一篇关于滑液支原体论文,丙酮酸脱氢酶论文,共表达论文,农业生物技术学报2019年09期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自农业生物技术学报2019年09期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
标签：滑液支原体论文; 丙酮酸脱氢酶论文; 共表达论文; 农业生物技术学报2019年09期论文;