β-葡聚糖促进骨髓单核细胞分泌血管原性生长因子

论文摘要

目的:在β-葡聚糖作用下的骨髓单核细胞能够促进血管原性生长因子的分泌以及内在的可能机制。方法:从280克-320克六只雄性Lewis大鼠中提取胫骨及股骨的骨髓细胞,经过一系列的密度梯度离心及白细胞裂解而得到骨髓单核细胞。以RPMI-1640和1%的胎儿牛血清作为培养基,向装有骨髓单核细胞的24孔细胞培养板（1x107cells/well）中加入β-葡聚糖（10ug/ml、100ug/ml）或不加入β-葡聚糖,分别在正常氧分压（95%O2/5%CO2）和低氧分压（1%O2/5%CO2）下,37℃温箱内孵育。孵育22个小时后,用不含血清的RPMI液进行2次培养基上清液的清洗以去除非贴壁细胞,而贴壁细胞在RPMI-1640和1%的胎儿牛血清作为培养液的条件下,在正常氧分压的温箱内继续孵育48小时。用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测细胞培养上清液中的血管内皮生长因子（VEGF）的水平。以含有不同浓度上清的细胞培养液培养人脐静脉内皮细胞,分析骨髓单核细胞培养上清对脐静脉内皮细胞增殖的影响。从培养的骨髓单核细胞中提取RNA进行RT-PCR分析。结果:ELISA结果显示,正常氧分压和低氧分压时,无β-葡聚糖作用的骨髓单核细胞分泌的VEGF蛋白水平明显低于低浓度β-葡聚糖组分泌的水平,两者比较差异显著;无β-葡聚糖作用的骨髓单核细胞在低氧分压时分泌的VEGF蛋白水平明显高于正常氧分压时分泌的水平,两者比较差异显著;在本实验所采用的β-葡聚糖浓度范围内,随着β-葡聚糖浓度的升高,VEGF蛋白分泌水平并不增高。RT-PCR分析表明,低氧分压时,低浓度β-葡聚糖组VEGF mRNA表达水平明显高于无β-葡聚糖组。MTT结果显示,低氧分压时,随着骨髓单核细胞培养上清液浓度的增高,低浓度β-葡聚糖作用的骨髓单核细胞上清液和高浓度β-葡聚糖作用的骨髓单核细胞上清液MTT比色光密度值都增高,且分别高于无β-葡聚糖组,两者比较差异显著。结论:首次研究了β-葡聚糖对骨髓单核细胞分泌血管原性生长因子的影响。在低氧分压的条件下,经β-葡聚糖激活的骨髓单核细胞的VEGF mRNA表达和蛋白质合成明显提高。β-葡聚糖激活的骨髓单核细胞的上清液明显提高人脐静脉内皮细胞的增殖能力。β-葡聚糖促进骨髓单核细胞血管原性生长因子的分泌,有助于血管的新生,为临床缺血性疾病的治疗提供一种新思路。

论文目录

• 一 中文摘要
• 二 英文摘要
• 三 前言
• 四 文献综述
• 五 材料与方法
• 六 结果
• 七 讨论
• 八 结论
• 九 参考文献
• 十 致谢
• 十一 英文缩写