论文摘要
目的:检测COX-2蛋白及mRNA在乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MCF-7中的表达;检测应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用前、后,细胞株中COX-2mRNA和蛋白的表达是否存在差异,并观察塞来昔布对细胞株生长的影响,为临床乳腺癌治疗中塞来昔布的应用提供实验依据。方法:1.采用免疫组织化学染色的方法,检测72例乳腺癌组织标本中COX-2蛋白的表达;2.细胞培养:人乳腺癌细胞株MCF-7常规培养于含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中,在37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中传代培养,采用对数生长期细胞进行实验;3.采用胶体金标记免疫电镜的方法,检测乳腺癌细胞株MCF-7中COX-2蛋白在超微结构中的表达;4.采用免疫组化染色的方法,检测选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用前、后,乳腺癌细胞株MCF-7中COX-2蛋白的表达;5.采用原位杂交的方法,检测选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用前、后,乳腺癌细胞株MCF-7中COX-2 mRNA的表达;6.采用四甲基偶氮哗蓝（MTT）检测方法,观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布对乳腺癌细胞株MCF-7生长的影响。结果:1.免疫组织化学染色结果显示:在收集的72例临床乳腺癌组织标本中,39例COX-2表达为阳性,阳性率为54.2%（39/72）;2.胶体金标记免疫电镜结果显示:黑色圆形的COX-2胶体金颗粒存在于乳腺癌细胞株MCF-7的内质网和核膜上,偶见核内;3.细胞免疫组化染色结果显示:乳腺癌细胞株MCF-7中存在COX-2蛋白的表达;应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用后,细胞表达COX-2蛋白明显减少,具有显著性差异（P＜0.05）;4.原位杂交染色结果显示:乳腺癌细胞株MCF-7中存在COX-2 mRNA的表达;应用选择性COX-2抑制剂塞来昔布作用后,COX-2表达量明显减少,具有显著性差异（P＜0.05）;5.MTT法检测结果显示:塞来昔布可明显抑制MCF-7细胞的生长,塞来昔布作用24h,随药物浓度的增加,细胞抑制率从13.5%增加到42.3%;作用48h后,随药物浓度的增加,细胞抑制率从17.0%增加到57.7%;作用72h后,随药物浓度的增加,细胞抑制率从27.0%增加到80.2%,随药物浓度的增加和时间的延长,细胞凋亡数目逐渐增加,呈浓度和时间依赖性。结论:1.从免疫组化和原位杂交证实:54.2%乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MCF-7中存在COX-2的表达;2.选择性COX-2抑制剂塞来昔布可显著抑制乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,呈浓度和时间依赖性。提示COX-2可作为乳腺癌治疗的新的分子靶点,为临床应用COX-2抑制剂治疗乳腺癌提供了重要的理论依据。