中国明对虾双功能分子β-1，3-葡聚糖结合蛋白—脂蛋白的研究

论文摘要

本文首次研究了中国明对虾βGBP-HDL基因的相关内容,对理解βGBP-HDL的发生、作用和调控机制,提高营养利用率,研究对虾病害防治有重要的理论意义。通过同源克隆方法,成功的克隆出中国明对虾βGBP-HDL部分cDNA序列,发现与凡纳滨对虾的βGBP-HDL cDNA序列有高达93%的同源性。运用RT-PCR方法对中国明对虾βGBP-HDL的组织表达和发育阶段的表达情况进行了研究,结果表明:中国明对虾的βGBP-HDL在肝胰腺、血细胞和肠中表达,且在肝胰腺中的合成量最高;此种蛋白在中国明对虾的整个发育时期都有表达,证实中国明对虾βGBP-HDL基因为组成型。利用半定量RT-PCR法对中国明对虾βGBP-HDL的营养相关作用进行了研究,发现在饲喂后2h,此蛋白基因表达量达到最高,24h达到最低,48h、72h、120h都有小幅度增加,并且,高脂饲料饲喂组βGBP-HDL相对表达量比对照组稍高,验证了中国明对虾βGBP-HDL参与对虾体内脂质运输。利用荧光定量PCR研究了白斑病毒刺激后中国明对虾βGBP-HDL表达差异,结果发现,刺激后蛋白相对表达量升高,6h时达到最高（P＜0.01）,之后又下降。表明βGBP-HDL参与了由病毒刺激引发的免疫级联反应,在防御病毒感染中发挥一定作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1.1 中国明对虾的养殖现状
• 1.2 β-1,3-葡聚糖结合蛋白的性质研究进展
• 1.3 β-1,3-葡聚糖结合蛋白基因分子克隆及表达研究进展
• 1.3.1 昆虫及其它无脊椎动物β-1,3-葡聚糖结合蛋白基因分子克隆的研究进展
• 1.3.2 甲壳动物β-1,3-葡聚糖结合蛋白基因分子克隆的研究进展
• 1.3.3 β-1,3-葡聚糖结合蛋白基因的表达研究进展
• 1.4 β-1,3-葡聚糖结合蛋白的作用研究进展
• 1.4.1 β-1,3-葡聚糖结合蛋白免疫相关作用研究进展
• 1.4.2 β-1,3-葡聚糖结合蛋白营养相关作用研究进展
• 1.5 研究目的
• 1.6 研究意义
• 第2章 中国明对虾βGBP-HDL部分cDNA序列的克隆和进化分析
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料和试剂
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 肝胰腺总RNA的提取
• 2.2.2 βGBP-HDL部分cDNA序列的扩增结果
• 2.2.3 βGBP-HDL部分cDNA序列及进化分析
• 2.3 讨论
• 第3章 中国明对虾βGBP-HDL基因表达特征的初步研究
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料与试剂
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 βGBP-HDL基因的组织表达
• 3.2.2 不同发育阶段βGBP-HDL基因的表达
• 3.3 讨论
• 第4章 饥饿及食物组成对中国明对虾βGBP-HDL基因表达的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料与试剂
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果
• 4.2.1 肝胰腺总RNA的提取
• 4.2.2 半定量RT-PCR优化后的条件
• 4.2.3 半定量RT-PCR结果
• 4.3 讨论
• 第5章 白斑病毒刺激后中国明对虾βGBP-HDL基因表达差异的研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料与试剂
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果
• 5.2.1 对虾鳃基因组DNA的提取
• 5.2.2 白斑病毒刺激后对虾感染情况检测
• 5.2.3 肝胰腺总RNA的提取
• 5.2.4 cDNA合成及目的条带的PCR扩增
• 5.2.5 SYBR Green实时荧光定量PCR反应条件的优化
• 5.2.6 SYBR Green实时荧光定量PCR检测结果
• 5.3 讨论
• 第6章 结论与讨论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果