CD147siRNA转染对Jurkat细胞体外增殖、活化、基质黏附和迁移能力的影响

论文摘要

目的研究CD147siRNA转染对人T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖和细胞周期的影响，以及对Jurkat细胞活化、细胞外基质黏附和迁移能力的影响。旨在初步明确CD147在人T细胞淋巴瘤细胞中的可能作用及机制，探讨将CD147作为靶分子，运用siRNA技术对人T细胞淋巴瘤进行基因治疗的可行性。方法1．将前期构建的重组质粒pSUPER／CD147siRNA稳定转染至Jurkat细胞中，采用半定量RT-PCR法和Western Blot方法分别检测转染细胞中CD147mRNA和蛋白的表达变化；2．采用MTT法检测转染pSUPER／CD147siRNA 24、48和72h后Jurkat细胞增殖水平的变化；3．运用流式细胞仪法检测转染pSUPER／CD147siRNA对Jurkat细胞周期和T细胞活化标记分子CD25表达的影响；4．用基质黏附实验检测转染pSUPER／CD147siRNA对Jurkat细胞外基质黏附能力的影响；5．用Transwell法检测CD147siRNA对Jurkat细胞跨内皮迁移能力的影响。结果1．转染pSUPER／CD147siRNA1后，Jurkat细胞中CD147mRNA和蛋白表达水平无显著下降（P＞0.05），转染pSUPER／CD147siRNA2后，Jurkat细胞中CD147mRNA和蛋白表达水平显著下降，干扰效果较好的两个细胞克隆干扰效率分别为67.12％和66.68％（P均＜0.001），将其建立为稳定转染的细胞株，分别命名为C2a、C2b，用于下一步的研究；2．C2a、C2b细胞在转染后24、48和72h的增殖水平均显著下降，其下降率分别为47.07％、55.27％；50.85％、54.75％；52.28％、57.21％（p＜0.01）；3．转染pSUPER／CD147siRNA2后，处于细胞周期G1期的Jurkat细胞由未转染时的53.00±1.87％显著减少到43.05±1.09％（C2a）和42.38±1.18％（C2b）（P均＜0.01），而S期的细胞由未转染时的34.53±0.52％显著增加到47.70±0.71％（C2a）和47.32±0.98％（C2b）（P均＜0.05）；4．转染pSUPER／CD147siRNA2后，Jurkat细胞表面CD25分子的表达水平由9.07％下降到5.06％（C2a）、5.57％（C2b）（P均＜0.05）；5．转染pSUPER／CD147siRNA2后，显著下调了C2a和C2b的细胞外基质黏附能力，下降率分别为29.74％和32.17％（P均＜0.01）；6．CD147siRNA2转染显著下调了Jurkat细胞的跨内皮迁移能力，迁移率由64.5±7.26％下降到14.72±3.74％（C2a）and 15.39±5.75％（C2b）（P均＜0.001）。结论1．建立了稳定转染pSUPER／CD147siRNA的人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株；2．CD147与Jurkat细胞的增殖、细胞周期、活化、基质黏附和迁移相关，可能在淋巴瘤的髓外浸润中起一定的作用；3．CD147可能是一种新的肿瘤治疗靶分子。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、缩略语表
• 四、论文正文
• 前言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 细胞系
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 主要试剂的配制
• 1.4 实验方法
• 1.5 统计学分析
• 第二章 结果
• 2.1 获得pSUPER/CD147siRNA干扰的Jurkat细胞克隆
• 2.2 pSUPER/CD147siNRA干扰的Jurkat阳性细胞克隆的检测鉴定
• 2.3 转染pSUPER/CD147siRNA2干扰序列后细胞周期的检侧结果
• 2.4 转染pSUPER/CD147siRNA2干扰序列后细胞增殖能力的变化
• 2.5 CD147siRNA抑制Jurkat细胞膜上活化标记分子CD25的表达
• 2.6 CD147siRNA可抑制Jurkat细胞对纤连蛋白的黏附
• 2.7 CD147siRNA可抑制Jurkat细胞体外跨内皮迁移能力
• 第三章 讨论
• 五、结论
• 六、参考文献
• 七、综述
• 八、致谢
• 九、攻读学位期间主要的研究成果