反义基因抑制PLOD2和Ι型胶原蛋白表达的研究

论文摘要

目的观察不同序列的反义寡脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN）对小鼠成纤维细胞（NIH/3T3） PLOD2（procollage-lysine 2-oxoglutarate5-dioxygenase 2）mRNA 和Ι型胶原蛋白表达的抑制效果。方法NIH/3T3 成纤维细胞接种于6 孔板后,加入三种不同序列的反义ODN（针对翻译起始部、针对第一第二外显子连接部、针对翻译终止部）和一种公共错义链。经5%CO2 37℃培养后,收集细胞以提取总RNA 和总蛋白,然后用RT-PCR 方法检测PLOD2mRNA、Ι型胶原蛋白α1 链（COLIα1）mRNA 的表达,同时以β-actin 表达为内对照;另以Western blot 方法检测Ι型胶原蛋白的表达量。将所得结果行组间方差统计分析。结果1.对PLOD2mRNA、COLIα1mRNA 的影响:翻译起始部、第一外显子和第二外显子连接部、翻译终止部的反义ODN 作用后的PLOD2 抑制率分别是0.57±0.05、0.22±0.05、0.31±0.06。反义ODN 组对PLOD2mRNA 的表达具有显著的抑制作用（P<0.05）。其中,翻译起始部的反义ODN 表现的抑制作用最强。反义及错义ODN 组COLIα1/β-actin 标准值分别是1.08±0.05、1.08±0.04、1.10±0.02、1.13±0.01,空白组为1.14±0.04,反义组与各对照组相比无明显下降,各组间无显著性差异（P﹥0.05）。2.对Ι型胶原蛋白表达的影响:翻译起始部、第一外显子和第二外显子连接部、终止密码部的反义ODN 作用后的Ι型胶原蛋白抑制率分别是0.44±0.01、0.18±0.04、0.23±0.03。反义ODN 组能显著的抑制Ι型胶原蛋白的表达（P<0.05）。其中,翻译起始部位的反义ODN 表现的抑制作用最强。结论反义ODN 对小鼠NIH/3T3 细胞PLOD2mRNA 和Ι型胶原蛋白的表达有明显的抑制作用。不同序列的反义ODN 对PLOD2mRNA 和Ι型胶原蛋白表达

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、前言
• 四、材料与方法
• 五、结果
• 六、讨论
• 七、结论
• 八、参考文献
• 九、附图
• 十、致谢
• 十一、综述