论文摘要
目的从体内和体外两个方面探讨香烟烟气对大鼠肺泡巨噬细胞免疫功能的影响,为吸烟致肺天然免疫损伤机制研究提供有力的科学依据。方法1.体外细胞实验:分别通过CCK-8法,Annexin-V FITC/PI双染法和CFSE荧光标记法分析香烟烟气提取物（CSE）对NR8383细胞的比活力、凋亡和分裂增殖的影响。收集经不同浓度CSE处理24h的NR8383细胞,与FITC标记的大肠杆菌共同孵育2h后,用流式细胞仪检测胞内荧光强度,分析CSE对NR8383细胞吞噬功能的影响。经不同浓度CSE处理后的NR8383细胞与荧光标记A549细胞共培养24小时,通过流式细胞仪检测NR8383细胞对A549细胞的生长抑制情况。用2, 7-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）染色后,荧光显微镜及流式细胞仪检测不同浓度CSE处理后的NR8383细胞内活性氧（ROS）水平,用紫外可见分光光度计检测胞内谷胱甘肽（GSH）水平的变化。2.体内动物实验选用清洁级wistar大鼠作为实验对象,分别设对照组（C组）、低剂量组（L组）、中剂量组（M组）和高剂量组（H组）,每组10只动物,染毒18天。观察大鼠的体重变化,分析血常规和血生化指标。通过肺灌洗收集大鼠肺泡巨噬细胞,通过流式细胞仪分析肺泡巨噬细胞凋亡、吞噬功能的变化以及具有吞噬功能阳性细胞所占比例。结果1.体外细胞实验结果NR8383细胞的吞噬功能随着CSE浓度的变化而先增强后降低。单独用CSE处理NR8383细胞,在100μg/mL浓度的CSE作用下,巨噬细胞的吞噬功能与对照组相比提高0.5倍,此时的细胞比活力最高。在CSE和LPS共同作用下,CSE的浓度为100μg/mL时,NR8383细胞的吞噬功能提高到正常水平的3倍。而当CSE浓度达到200μg/mL时,NR8383细胞的吞噬功能降低,细胞凋亡率为54.1%。NR8383细胞对A549细胞的抑制显示,随着CSE浓度的升高,抑制作用先增强而后减弱。在50μg/mL的CSE作用下,NR8383细胞对A549细胞的抑制作用最大。胞内ROS水平随着CSE浓度的升高,ROS水平先升高后下降。在25μg/mL的CSE作用下,胞内ROS水平降为对照组的74.32%,而在最高浓度作用下,胞内ROS水平是对照组的2.23倍。细胞内GSH水平随着CSE浓度的变化逐渐升高,在100μg/mL浓度时达到最高水平22.6μmol/L,而后随着CSE浓度的升高呈下降趋势。2.体内动物实验结果经香烟烟气染毒后,大鼠体重与正常对照组相比呈剂量依赖性下降。大鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率与染毒剂量呈正相关（r =0.998）。在较低的烟气作用下,大鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能与对照组相比有所提高,但中高剂量下,与对照组比较差异无统计学意义。经香烟烟气刺激后,肺泡巨噬细胞中的具有吞噬功能的阳性细胞所占比例与正常对照组相比明显升高。血常规检验和血生化部分指标与对照组相比,有统计学意义。结论:1、CSE可以影响NR8383细胞的吞噬功能,在较低浓度时可能提高巨噬细胞的吞噬功能,在较高浓度时降低巨噬细胞的吞噬功能2、香烟烟气在较低剂量具有激活肺泡巨噬细胞吞噬功能的潜能,并可以提高具有吞噬能力的巨噬细胞比例。3、低剂量香烟烟气导致巨噬细胞吞噬功能增强的可能机制是胞内ROS和GSH水平的相对变化。