不同作物灰霉病菌生物学特性的比较研究和番茄灰霉病的生防研究

论文摘要

从雅安近郊大兴果蔬大棚中发病的草莓、葡萄、辣椒等植株上分离获得6个灰霉菌株,经鉴定均为灰葡萄孢（Botrytis cinerea）。从雅安周边地区不同作物的土壤中分离获得绿色粘帚霉（Gliocladiumvirens）菌株59个。根据菌株来源、生长速度以及菌落颜色等,选取绿色粘帚霉菌株共30个,作为本实验的出发菌株。通过对6个不同作物上的灰霉菌菌株的生物学特性比较研究,结果表明:6个灰霉菌株在5～30℃下均可生长,17～23℃下生长速度最快。20℃～25℃是最佳产孢温度。分生孢子在5～30℃下均可萌发,最适萌发温度为20～25℃。pH值为4～11时灰霉菌丝均可生长,菌丝生长、产孢和孢子萌发的最适pH为6。黑暗环境有利于菌丝生长和菌落产孢。而孢子的萌发率则在光照条件下才能达到最高。PDA和PSA培养基都能较好促进菌丝生长和产孢。菌丝生长最佳碳源为葡萄糖,产孢的最佳碳源为蔗糖。天冬氨酸最能促进菌丝生长,而谷氨酸则最能促进产孢。菌丝生长和产孢的最佳碳氮比为30:1。当湿度低于80%时,分生孢子不能萌发,而在水滴中的萌发效果最好。温度、pH和培养基类型是灰霉菌丝生长及产孢的主要影响因素,故选用3因素、3水平的L9（33）正交表来安排正交实验。试验结果表明:20℃、pH6和PSA培养基的条件组合均为灰霉菌丝生长和菌落产孢的最佳条件;而所测试的3个因素对灰霉菌丝生长速度和菌落产孢的影响大小依次为:温度＞培养基类型＞pH。在生防菌株的筛选试验中,测定30个绿色粘帚霉菌株的生长速度均超过了25mm/d,其中编号为G27的菌株生长最快,达到了32.2mm/d。对峙培养试验中,培养72h后绿色粘帚霉菌株对灰霉菌丝生长抑制率在60.0%以上的有24个,占供试菌株的80%,其中G15最高,抑制率达66.8%。在非挥发性代谢产物测定试验中,绿色粘帚霉发酵液经细菌过滤器灭菌后,有6个菌株对灰霉菌丝生长抑制率超过了20%,G17最高,达到33.83%;发酵液经高压灭菌后抑制效果变差,G13最高,为23.34%。挥发性代谢产物对灰霉菌丝的抑制率要低于非挥发性代谢产物,最高的G13抑制率为18.67%。几种杀菌剂对蕃茄灰霉的室内药效试验结果表明:供试药剂对蕃茄灰霉菌菌丝的生长均有一定的抑制作用,且随浓度的增加抑制率增大。其中50%腐霉利WP的抑菌效果最好,其EC50仅为0.0283μg/ml,为所测药剂中最低,其相对毒力指数为1.2×10-3。其次是70%代森锰锌WP,EC50为1.6634μg/ml,相对毒力指数为0.72×10-1,也表现出较强的抑菌作用。而50%多菌灵WP在本次试验中抑菌效果最差,EC50为23.178μg/ml。盆栽防治实验的结果表明:播种16天后,空白对照的处理发病率最低,仅为5.6%;代森锰锌+灰霉的处理发病率为9.75%;粘帚霉麸培+灰霉的处理发病率为14.6%,略高于前者。播种20天时,对照蕃茄苗发病充分,而加入了粘帚霉和代森锰锌的处理发病率则分别控制在23.4%和15.5%。代森锰锌的防效较高,达到77.4%;粘帚霉次之,为66.1%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 灰霉病的病害症状
• 1.2 病原菌的分类学地位和形态学特征
• 1.3 病原菌的生物学特性
• 1.3.1 菌丝生长和产孢条件
• 1.3.2 分生孢子萌发的条件
• 1.4 病原菌的侵染循环和发病条件
• 1.4.1 侵染循环
• 1.4.2 发病条件
• 1.5 灰霉病的致病机制
• 1.5.1 酶
• 1.5.2 毒素
• 1.6 灰霉病防治的研究历史与现状
• 1.6.1 化学防治
• 1.6.2 农业防治
• 1.6.3 生物防治
• 1.7 本题目研究的特点
• 2 材料与方法
• 2.1 灰霉病菌的分离、纯化与鉴定
• 2.2 绿色粘帚霉的分离、纯化与鉴定
• 2.2.1 土样的采集
• 2.2.2 粘帚霉的分离与纯化
• 2.2.3 绿色粘帚霉的鉴定
• 2.3 6个灰霉菌株生物学特性的比较研究
• 2.3.1 温度对菌丝生长、产孢以及孢子萌发的影响
• 2.3.2 pH对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
• 2.3.3 光照对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
• 2.3.4 不同培养基对菌丝生长及产孢的影响
• 2.3.5 不同碳源对菌丝生长及产孢的影响
• 2.3.6 不同氨基酸对菌丝生长及产孢的影响
• 2.3.7 不同碳氮比对菌丝生长及产孢的影响
• 2.3.8 不同湿度对分生孢子萌发的影响
• 2.3.9 蕃茄灰霉的固体培养条件筛选
• 2.4 绿色粘帚霉生防菌株的筛选实验
• 2.4.1 粘帚霉生长速度的测定
• 2.4.2 对峙培养
• 2.4.3 非挥发性代谢产物测定
• 2.4.4 易挥发性代谢产物测定
• 2.5 几种杀菌剂对蕃茄灰霉菌的毒力测定
• 2.5.1 药剂的选择
• 2.5.2 测定方法
• 2.6 盆栽防治实验
• 2.6.1 盆栽土的准备
• 2.6.2 病原菌和生防菌接种体的准备
• 2.6.3 种子的准备
• 2.6.4 播种
• 2.6.5 设计处理与观察记载
• 3 结果与分析
• 3.1 灰霉的分离、纯化与鉴定
• 3.1.1 菌落特征观察
• 3.2 粘帚霉的分离、纯化与鉴定
• 3.2.1 菌落特征观察
• 3.2.2 产孢结构和分生孢子的形态特征观察
• 3.2.3 出发菌株的筛选
• 3.3 6个灰霉菌株生物学特性的比较研究
• 3.3.1 温度对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
• 3.3.2 pH对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
• 3.3.3 光照对菌丝生长、产孢及孢子萌发的影响
• 3.3.4 不同培养基对菌丝生长及产孢的影响
• 3.3.5 不同碳源对菌丝生长及产孢的影响
• 3.3.6 不同氨基酸对菌丝生长及菌落产孢的影响
• 3.3.7 不同碳氮比对菌丝生长及产孢的影响
• 3.3.8 不同湿度对灰霉分生孢子萌发的影响
• 3.3.9 蕃茄灰霉的固体培养条件筛选
• 3.4 绿色粘帚霉生防菌株的筛选实验
• 3.4.1 粘帚霉的生长速度测定
• 3.4.2 对峙培养
• 3.4.3 非挥发性代谢产物测定
• 3.4.4 挥发性代谢产物对灰霉菌丝生长的抑制作用
• 3.5 几种杀菌剂对蕃茄灰霉菌的毒力测定
• 3.6 盆栽防治实验
• 4 结论与讨论
• 4.1 灰霉菌的分离与鉴定
• 4.2 绿色粘帚霉的分离和鉴定
• 4.3 6个灰霉菌株生物学特性的比较研究
• 4.4 绿色粘帚霉对蕃茄灰霉病菌的生防机制
• 4.5 几种杀菌剂对蕃茄灰霉菌的毒力测定
• 4.6 盆栽防治试验
• 4.7 存在的问题和展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间发表论文