竹笋总黄酮提取及醇提物对酪氨酸酶活性的影响

论文摘要

竹为禾本科竹亚科多年生的常绿植物，竹提取物具有优良的清除自由基、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒等作用，竹笋具有食用和医疗保健价值。本文以不同竹种、不同季节的四种竹笋笋肉、笋壳为原料，以总黄酮提取量为评价指标，在单因素试验的基础上,采用正交试验的方法，优化竹笋中黄酮类化合物的最佳提取工艺；运用LC-MS技术对竹笋纯化物有效活性成分进行分析；研究了竹笋醇提物和纯化物对酪氨酸酶的活性影响，旨在为竹笋中黄酮类化合物提取的工业化生产和天然美白化妆品添加剂的筛选提供理论依据和技术支撑。研究成果如下：1、以毛竹春笋肉为原料，采用水提取、乙醇热回流提取和超声波提取三种提取方法，以可能影响竹笋黄酮类化合物提取的主要因子提取温度、提取时间、固液比、PH值、和乙醇体积分数进行单因素试验，并以提取温度、提取时间、固液比、pH值和乙醇体积分数进行正交试验，筛选竹笋黄酮类化合物提取的最佳工艺。结果表明：三种方法比较，在研究范围内，以乙醇热回流提取效果最好得率最高，其最佳提取工艺为：固液比1：40，温度60℃，乙醇体积分数70%，提取时间2.0h。2、以毛竹春笋肉为原料，以毛竹春笋肉提取液中总黄酮的含量及回收率为考察指标，通过动态吸附动力学研究，对比分析了AB-8、D101两种大孔树脂对毛竹春笋肉提取液中总黄酮的分离纯化效果。结果表明：竹笋中黄酮类化合物最佳纯化条件为：AB-8大孔树脂吸附、75%乙醇体积分数洗脱。3、利用高效液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）分析不同竹种、不同季节竹笋纯化物中的有效化学成分。结果表明：不同竹种、不同季节竹笋纯化物中的化学成分有差异，各纯化物中的化学成分均含有黄酮类及其衍生物、生物碱、氨基酸类、糖类、酯类、脂肪酸（亚油酸、亚麻酸等）、芳香类化合物等；毛竹冬笋中特含有三萜类、苯类等物质，毛竹春笋中特含有不饱和醇等物质，雷竹笋中无特有成分，麻竹笋中有脂肪醇等物质。4、以曲酸为对照，利用分光光度法研究了不同竹种、不同季节笋肉、笋壳醇提物对马铃薯酪氨酸酶单酚酶和双酚酶的抑制作用。结果表明：在设定浓度2.5mg/ml-40.0mg/ml范围内，随着生药量浓度的增加，不同竹种、不同季节笋肉、笋壳醇提物对马铃薯酪氨酸酶单酚酶和双酚酶的抑制作用增强。当醇提物浓度为40mg/ml时，毛竹冬笋肉对酪氨酸酶单酚酶和双酚酶的抑制作用最强，毛竹冬笋壳的抑制作用最弱。毛竹冬笋肉对单酚酶的抑制作用低于10.0mg/ml曲酸的作用；但毛竹冬笋肉和雷竹笋肉对双酚酶的抑制率优于10.0mg/ml曲酸的作用。5、以常用的美白添加剂熊果苷和曲酸为对照，研究了不同竹种、不同季节笋肉、笋壳纯化物对标品酪氨酸酶的抑制作用。结果表明：在设定浓度0.2mg/ml-1.0mg/ml范围内，不同竹种、不同季节笋肉、笋壳纯化物对酪氨酸酶抑制作用均随着浓度的增加而增强。麻竹笋对酪氨酸酶抑制作用最强，其次为毛竹春笋、毛竹冬笋，雷竹笋最弱。其中麻竹笋肉对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用最强，麻竹笋壳对双酚酶的抑制作用最强。当纯化物浓度为1.0mg/ml时，麻竹笋肉对单酚酶的抑制作用优于0.1mg/ml曲酸的作用，麻竹笋肉、毛竹春笋肉和麻竹笋壳的作用优于0.1mg/ml熊果苷的作用；且三种竹笋的笋肉、笋壳对双酚酶的抑制作用均优于0.08mg/ml曲酸的作用，麻竹笋壳、笋肉对双酚酶的抑制作用优于0.08mg/ml熊果苷的作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 文献综述
• 1 竹笋栽培技术及加工研究现状
• 1.1 竹笋丰产栽培管理研究
• 1.1.1 雷竹笋丰产栽培管理研究
• 1.1.2 毛竹笋丰产栽培管理研究
• 1.1.3 麻竹笋丰产栽培管理研究
• 1.2 竹笋加工利用研究
• 2 竹主要品质特征成分研究
• 2.1 竹黄酮类化合物
• 2.2 竹活性多糖类物质
• 2.3 竹挥发性成分
• 2.4 竹特种氨基酸
• 3 竹提取物生物活性研究
• 3.1 竹提取物抗氧化作用研究
• 3.2 竹提取物防腐抑菌作用研究
• 3.3 竹提取物控制害虫作用研究
• 4 竹黄酮类化合物提取及成分分析
• 4.1 竹黄酮类化合物提取
• 4.2 竹黄酮类化合物分离、纯化
• 4.3 竹黄酮类化合物测定方法研究
• 5 黑色素生成与酪氨酸酶的研究
• 5.1 黑色素结构与功能
• 5.2 黑色素合成机理
• 5.3 酪氨酸酶研究进展
• 6 美白化妆品添加剂研究进展
• 7 本研究的目的与意义
• 引言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 仪器和试剂
• 2.1 主要仪器
• 2.2 主要试剂和药品
• 3 试验方法
• 3.1 竹笋黄酮类化合物的提取
• 3.1.1 标准曲线制作
• 3.1.2 样品提取与测定
• 3.1.3 水提取单因素试验
• 3.1.4 水提取正交试验
• 3.1.5 乙醇热回流提取单因素试验
• 3.1.6 乙醇热回流提取正交试验
• 3.1.7 超声波提取单因素试验
• 3.1.8 超声波提取正交试验
• 3.2 竹笋黄酮类化合物纯化
• 3.2.1 竹笋醇提物制备
• 3.2.2 大孔树脂的预处理
• 3.2.3 黄酮类化合物纯化
• 3.3 竹笋纯化物有效成分分析
• 3.3.1 样品制备
• 3.3.2 色谱条件
• 3.4 竹笋醇提物对马铃薯酪氨酸酶活性的影响
• 3.4.1 竹笋样品制备
• 3.4.2 马铃薯酪氨酸酶液制备
• 3.4.3 马铃薯酪氨酸酶活力测定
• 3.4.4 竹笋醇提物对酪氨酸酶活性影响的测定
• 3.5 竹笋纯化物对标品酪氨酸酶活性的影响
• 3.5.1 样品制备
• 3.5.2 样品稀释
• 3.5.3 竹笋纯化物、曲酸和熊果苷对酪氨酸酶活性的影响
• 结果与分析
• 1 毛竹春笋肉黄酮类化合物提取工艺的研究
• 1.1 水提取单因素试验
• 1.1.1 温度对浸提效果的影响
• 1.1.2 固液比对浸提效果的影响
• 1.1.3 提取时间对浸提效果的影响
• 1.1.4 溶剂 pH 值对浸提效果的影响
• 1.2 水提取正交试验结果
• 1.3 乙醇热回流提取单因素试验
• 1.3.1 乙醇浓度对浸提效果的影响
• 1.3.2 固液比对浸提效果的影响
• 1.3.3 提取时间对浸提效果的影响
• 1.3.4 温度对浸提效果的影响
• 1.4 乙醇热回流提取正交试验结果
• 1.5 超声波提取单因素试验
• 1.5.1 温度对浸提效果的影响
• 1.5.2 固液比对浸提效果的影响
• 1.5.3 提取时间对浸提效果的影响
• 1.5.4 乙醇浓度对浸提效果的影响
• 1.6 超声波提取正交试验结果
• 2 竹笋黄酮类化合物纯化
• 2.1 毛竹春笋肉黄酮类化合物纯化结果
• 2.2 不同竹种不同季节竹笋纯化物黄酮类化合物含量
• 3 竹笋纯化物有效成分分析
• 3.1 不同季节毛竹竹笋化学成分分析
• 3.1.1 毛竹冬笋化学成分分析
• 3.1.2 毛竹春笋化学成分分析
• 3.2 不同竹种竹笋化学成分分析
• 3.2.1 雷竹笋化学成分分析
• 3.2.2 麻竹笋化学成分分析
• 4 竹笋醇提物对马铃薯酪氨酸酶活性的影响
• 4.1 马铃薯酪氨酸酶活力测定
• 4.1.1 酪氨酸酶的动力学方程
• 4.1.2 酪氨酸酶的活性计算
• 4.2 不同浓度曲酸对酪氨酸酶的抑制效果
• 4.3 不同浓度竹笋醇提物对酪氨酸酶单酚酶活力影响
• 4.4 不同浓度竹笋醇提物对酪氨酸酶双酚酶活力影响
• 5 竹笋纯化物对标品酪氨酸酶活性的影响
• 5.1 测试物对酪氨酸酶单酚酶活性的影响
• 5.2 测试物对酪氨酸酶双酚酶活性的影响
• 讨论
• 1 竹笋黄酮类化合物的提取
• 2 毛竹春笋肉黄酮类化合物纯化
• 3 竹笋纯化物有效成分分析
• 4 竹笋醇提物及纯化物对酪氨酸酶活性的影响
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 发表论文