论文题目: 组织工程皮肤替代物的研制与应用
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 马忠锋
导师: 柴家科
关键词: 烧伤,组织工程皮肽,猪去细胞真皮基质,高渗盐水,氢氧化钠法,自体微粒皮,细胞体外培养,胶原,活性复合真皮基质,气液相培养,基因表达,基底膜
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:研制无细胞毒性猪去细胞真皮基质(PADM),进行PADM修复深度烧伤创面的实验研究及临床观察;制备成纤维细胞-胶原-PADM复合基质,构建组织工程全层皮肤并进行烧伤创面修复的实验研究。 方法:1.取0.3-0.4mm厚的猪断层皮片,使用高渗盐水/氢氧化钠法制备PADM,经交联和消毒后进行细菌学及猪病毒学检测。PADM植入SD大鼠皮下,术后动态观察。SD大鼠背部做全层皮肤缺损,实验组Ⅰ(高渗盐水/氢氧化钠法制备的PADM+自体微粒皮、同种异体皮移植)、实验组Ⅱ(Dispase Ⅱ/TritonX-100法制备的PADM+自体微粒皮、同种异体皮移植),手术后2,4、6周动态观察植皮成活情况。在知情同意的前提下,大面积深度烧伤患者切削痂后创面,应用PADM+自体微粒皮+异体皮覆盖创面,手术后观察创面愈合情况。2.酶消化法进行表皮细胞和成纤维细胞培养,绘制表皮细胞原代生长曲线,MTT法测定传代后表皮细胞的增殖。成纤维细胞直接或与胶原混合后种植于PADM表面,构建活性真皮替代物。ELISA法测定培养液中人TGF-β1、bFGF含量。表皮细胞种植在活性真皮基质的胶原面,构建组织工程皮肤。RT-PCR法检测气-液面培养对表皮细胞bFGF、TGF-β1、KGF表达影响。SD大鼠背部全层皮肤缺损,分别进行组织工程皮肤(实验Ⅰ组)和单纯表皮细胞膜片移植(实验Ⅱ组)的实验研究。 结果:1.PADM无细胞成分,细菌学和病毒检测均为阴性。大鼠皮下植入PADM术后24周,仍然可见其结构。2.实验组Ⅰ、Ⅱ愈合质量无差异,上皮细胞分化良好,胶原纤维排列有序,基底膜完整。PADM结合自体微粒皮和异体皮移植,创面愈合质量明显优于自体微粒皮和异体皮移植的临床效果。3.成纤维细胞和表皮细胞体外培养均贴壁生长。原代表皮细胞生长速度为包皮组>头皮组>腋窝组,经过传代后不同部位表皮细胞生长增殖无差别(P>0.05)。4.实验组Ⅰ的TGF-β和bFGF含量至第8天已经达到稳定水平,实验组Ⅱ第4天含量达到稳定水平,实验组Ⅱ的细胞因子含量高于实验组Ⅰ(P<0.05)。5.组织工程皮肤具有上皮层和真皮层,表皮细胞之间有桥粒连接。气
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前言
第一部分 无细胞毒性PADM的研制及其作为真皮替代物在深度烧伤切痂创面修复中的应用
实验一 PADM的制备和微生物学检测以及体内转归的实验研究
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．两种制备方法
3．微生物学检测
4．动物模型
实验结果
1．物理特性及组织学特点
2．微生物学检测结果
3．体内转归
讨论
参考文献
照片
实验二 PADM与微粒皮、同种异体皮修复深度烧伤切痂创面的研究
一、PADM与自体微粒皮、同种异体皮修复深度烧伤切痂创面的实验研究
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．动物模型及分组
3．创面愈合情况的大体观察
4．组织学观察
5．统计学处理
实验结果
1．创面大体观察
2．组织学检查
二、PADM与自体微粒皮、异体皮移植修复切痂创面的临床观察
1．一般资料
2．移植方法
3．结果
4．典型病例
讨论
参考文献
照片
第二部分 组织工程全层皮肤替代物的研究与应用
实验一 异体细胞库的建立
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．表皮细胞库的建立
3．成纤维细胞库的建立
实验结果
讨论
参考文献
照片
实验二 人体不同部位表皮细胞体外培养及生长活性的实验研究
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．取材
3．人表皮细胞的原代培养
4．表皮细胞的形态学观察
5．表皮细胞生长曲线
6．MTT法测定传代后表皮细胞的生长增殖
7．统计学处理
实验结果
1．表皮细胞活性测定
2．表皮细胞生长增殖特点
3．各组原代表皮细胞的生长曲线
4．传代后不同部位表皮细胞生长增殖活力的比较
讨论
参考文献
实验三 活性真皮基质的研制及生物学活性检测
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．高渗盐水／氢氧化钠方法制备PADM
3．制备Ⅰ型胶原凝胶
4．活性真皮替代物的构建
5．培养上清液细胞因子的测定
6．统计学分析
实验结果
1．活性真皮基质
2．培养液中细胞因子的检测
讨论
参考文献
照片
实验四 以成纤维细胞-胶原-PADM为载体构建组织工程皮肤的实验研究
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．Fb-胶原-PADM的制备
3．复合皮的培养
4．组织学观察
实验结果
1．HE染色结果
2．电镜观察结果
讨论
参考文献
照片
实验五 气-液相培养对组织工程复合皮表皮细胞分化及基因表达影响的实验研究
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．实验分组
3．组织学观察
4．RT-PCR检测
实验结果
1．组织学观察
2．RT-PCR检测
讨论
参考文献
实验六 组织工程皮肤修复全层缺损的实验研究
材料与方法
1．主要试剂及仪器
2．乳鼠表皮细胞和成纤维细胞的体外培养
3．乳鼠组织工程复合皮的制备
4．表皮细胞膜片的制备
5．动物模型及分组
6．创面愈合情况的大体观察
7．创面组织学观察
8．统计学处理
实验结果
1．术中情况
2．创面大体观察
3．组织学检查
讨论
参考文献
照片
实验结论
文献综述
文献综述一 表皮细胞培养移植的研究现状与展望
文献综述二 表皮细胞培养移植载体的研究与应用
文献综述三 组织工程皮肤在创面修复中的应用
学习期间发表论文及其他
致谢
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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