G-蛋白表达水平与乙醇性脂肪肝发生发展及肝癌细胞系HepG2的增殖抑制关系的初步研究

论文摘要

目的探讨G蛋白（Guanine nucleotide- binding proteins,G-protein）信号转导通路在乙醇性脂肪肝发病及其在褪黑素抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用。方法采用高脂饮食配合乙醇灌胃,制备大鼠脂肪肝模型。6周末取血,检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）,门冬氨酸氨基转移酶（AST）,甘油三酯（TG）,总胆固醇（TC）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）;制备石蜡及冰冻切片,进行肝脏病理学检查。Western blot分析各组大鼠肝脏组织中抑制型G蛋白α1（Gαi1）,抑制型G蛋白α2（Gαi2）,抑制型G蛋白α3（Gαi3）,刺激型G蛋白（Gαs）表达水平的改变。采用MTT法检测MT （Melatonin,褪黑素）对肝癌细胞HepG2生长的影响,放免法检测细胞内cAMP水平,western blot法检测抑制型G蛋白α1（Gαi1）,抑制型G蛋白α2（Gαi2）,抑制型G蛋白α3（Gαi3）,刺激型G蛋白（Gαs）表达水平。结果乙醇联合高脂饮食条件下大鼠血清ALT,AST,TG,TC明显升高且伴有HDL-C的显著下降;HE及Oil Red O（油红O）染色结果显示乙醇联合高脂饮食组大鼠肝脏脂肪变明显;模型组大鼠肝组织中的Gαi1,Gαi2,Gαs表达明显下降,Gαi3的表达水平在模型组中呈增高趋势,同时还发现模型组大鼠肝脏组织骨桥蛋白（Osteopontin, OPN）明显升高,且与乙醇剂量正相关。MTT检测结果表明,MT在10-8～10-5mol·L-1的浓度范围内,72h共培养后,可有效抑制HepG2细胞增殖,且呈一定的时间-浓度依赖关系。为进一步研究MT细胞增殖抑制作用与G蛋白-cAMP信号通路的关系,检测浓度10-5mol·L-1的MT作用HepG2细胞0min,15min,30min,45min,60min,90min,120min后Gαi1,Gαi2,Gαi3和Gαs和细胞内cAMP水平变化,结果发现MT作用HepG2细胞30min后可明显下调Gαi1, Gαi2,Gαi3的表达水平,但对Gαs表达无明显影响,同时发现MT处理后cAMP水平有下降的趋势,但是无统计学意义。结论G蛋白表达水平及其下游信号转导通路的改变可能和乙醇性脂肪肝的发病相关,OPN可能参与乙醇性脂肪肝的发病。MT呈时间和浓度依赖性抑制HepG2细胞的增殖,可能和G蛋白信号转导通路相关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 乙醇性脂肪肝大鼠模型 G 蛋白表达水平的变化
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 褪黑素对肝癌细胞系 HepG2 的增殖抑制作用及其与 G 蛋白-cAMP 信号途径的关系
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 对课题的进一步设想
• 附录
• 简历
• 教育背景
• 学术科研
• 目前待发表和已发表的论文
• 专业技能
• 致谢
• 综述 （乙醇性脂肪肝病）
• 参考文献