半夏泻心汤对EG模型小鼠血清中相关免疫球蛋白及MBP mRNA表达的影响

半夏泻心汤对EG模型小鼠血清中相关免疫球蛋白及MBP mRNA表达的影响

论文摘要

目的:建立嗜酸细胞性胃肠炎(EG)小鼠模型,用半夏泻心汤干预治疗,通过相关药效学指标验证该模型是否可以作为半夏泻心汤方证模型;检测胃肠粘膜主要碱性蛋白(MBP) mRNA表达水平,探讨半夏泻心汤是否通过作用于毒覃碱受体这一机制调节胃肠运动,治疗EG。方法:实验用雌性Balb/c小鼠34只,适应性喂养一周后,随机分为2组,空白对照组8只,处理组26只。处理组以腹腔注射OVA/Al(OH)3结合PLGA包裹的OVA颗粒灌胃制备EG小鼠模型。观察胃肠道病理切片,检测外周血嗜酸性粒细胞,IgE、IgG1含量,以验证造模成功。将处理组随机分为治疗组、西药对照组、中药对照组、模型组。治疗组给予半夏泻心汤,中药对照组给予香砂六君子汤,西药对照组给予泼尼松龙治疗,模型组给予等量生理盐水。每天给药一次,共20天,给药结束后第三天取材。HE染色观察实验各组小鼠胃肠粘膜组织病理学变化。采用酶联免疫技术测定小鼠外周血IgE、IgG1含量,荧光定量PCR技术测定小鼠胃肠组织中MBP mRNA表达。采用统计学软件SPSS13.0进行分析。结果:1.EG小鼠一般情况观察:空白对照组小鼠毛发光泽,精神好,食量和便质正常,体重增长明显。与空白对照组相比,模型组小鼠,毛色枯黄、精神差、饮食减少、腹泻、便质稀软,体重增长不明显。西药对照组和半夏泻心汤组,体重较用药前增加明显,毛色较之前有光泽、精神好转、便质较稠,有所改善。与半夏泻心汤组相比,中药对照组小鼠一般情况虽有所改善,但不如其疗效明显。2.EG小鼠病理形态的观察:空白对照组小鼠胃肠粘膜结构层次清楚,无炎症、充血与水肿;模型组与空白对照组相比,可见胃肠粘膜组织缺损,充血,水肿,糜烂,有中性粒细胞、嗜酸性粒细胞炎症细胞浸润。西药对照组与半夏泻心汤组炎症部位较小,粘膜层增厚,充血,水肿,糜烂较模型组轻,有肉芽组织生成覆盖溃疡面,炎症细胞浸润较少。中药对照组炎症反应较半夏泻心汤组重,仍可见大量炎症细胞浸润。3.外周血中嗜酸粒细胞,IgE、IgG1含量的测定:造模完成后,处理组外周血嗜酸粒细胞,IgE、IgG1含量均比空白对照组高,差别具有统计学意义(P<0.05)。用药治疗后,模型组嗜酸粒细胞,IgE和IgG1含量与空白对照组相比,有显著性差异(P<0.05);半夏泻心汤组、西药对照组,中药对照组与模型组相比,嗜酸粒细胞,IgE和IgG1含量降低,有显著性差异(P<0.05);半夏泻心汤组与西药对照组相比,嗜酸粒细胞,IgE和IgG1含量的差别无统计学意义(P>0.05);而中药对照组与半夏泻心汤组相比,嗜酸粒细胞含量的差别有统计学意义(P<0.05);IgE和IgG1含量的差别无统计学意义(P>0.05),但半夏泻心汤组IgE和IgG1含量低于中药对照组的含量。4.胃肠组织中MBP mRNA表达水平测定:与空白对照组相比,模型组MBP mRNA表达水平增高,有显著性差异(P<0.05);用药治疗后,西药对照组、半夏泻心汤组胃肠组织中MBP mRNA表达水平比模型组低,差别具有统计学意义(P<0.05);中药对照组胃部MBP mRNA表达水平与模型组相比,差别有统计学意义(P<0.05),但其肠部MBP mRNA表达水平与模型组相比,差别无统计学意义(P>0.05);半夏泻心汤组与西药对照组相比,差别无统计学意义(P>0.05);而中药对照组与半夏泻心汤组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:1.单用腹腔注射OVA/A1(OH)3凝胶和OVA溶液,胃肠致敏作用不明显,追加PLGA包裹的OVA微粒灌胃,可以成功建立EG小鼠模型。2.采用半夏泻心汤治疗EG小鼠模型,疗效满意,与西药特效药泼尼松龙相似,疗效好于香砂六君子汤,表明EG小鼠模型可以作为半夏泻心汤方证模型。3.应用半夏泻心汤可降低EG小鼠外周血IgE、IgG1含量,使胃肠组织黏膜受损情况得以减轻,说明半夏泻心汤能够通过调节免疫功能参与胃肠组织的修复。4.嗜酸性粒细胞通过释放MBP以诱发毒蕈碱性受体(M2)的功能障碍,引起平滑肌收缩,促使神经轴突坏死,降低胃蠕动和胃排空的功能。EG小鼠模型MBP呈高表达。半夏泻心汤能抑制EG小鼠模型MBP mRNA的表达,提示该方可抑制MBP的释放,阻断由此诱发的毒蕈碱性受体(M2)功能障碍,减轻炎症,促使胃肠功能的恢复。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略语(Abrevitions)
  • 目录
  • 前言
  • 第一部分:文献综述
  • 1 半夏泻心汤防治胃肠道疾病的研究进展
  • 2 嗜酸细胞性胃肠炎的研究进展
  • 3 半夏泻心汤与嗜酸细胞性胃肠炎相关性分析
  • 第二部分:实验研究
  • 实验一 EG小鼠模型的建立与验证
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 实验二 半夏泻心汤对EG小鼠一般情况与病理形态的影响
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 实验三 半夏泻心汤对EG小鼠外周血中嗜酸粒细胞计数,IgE,IgG1含量的影响
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 实验四 半夏泻心汤对EG小鼠胃肠组织中MBP表达的影响
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 3 实验结果
  • 讨论
  • 1 EG小鼠实验模型的建立
  • 2 EG小鼠模型为半夏泻心汤方证的特异性模型
  • 3 半夏泻心汤治疗EG的作用机制
  • 结论
  • 展望
  • 参考文献
  • 附录1 SPSS13.0软件编程及随机分组结果
  • 附录2 EG小鼠造模后胃肠病理组织观察图片(HE染色)
  • 附录3 EG小鼠用药后胃部病理组织观察图片(HE染色)
  • 附录4 EG小鼠用药后肠部病理组织观察图片(HE染色)
  • 在校期间发表论文情况
  • 致谢
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