半枝莲提取物对白血病K562细胞增殖与凋亡的影响及相关机制的探讨

论文摘要

目的探讨半枝莲提取物对白血病K562细胞增殖及凋亡的作用,以及对K562细胞血管内皮生长因子（VEGF）及其受体－1（VEGFR-1）表达的影响。方法实验组（半枝莲提取物0.1mg/ml,0.2mg/ml,0.5mg/ml, 1.0mg/ml）及空白对照组（半枝莲提取物Omg/ml）,作用于K562细胞24、48、72小时后：在倒置显微镜下观察K562细胞形态；MTT法检测各组对K562细胞增殖情况的影响；流式细胞仪技术检测K562细胞凋亡及细胞周期分布情况。各实验组及空白对照组作用于K562细胞48小时后：RT-PCR法检测K562细胞中VEGF、VEGFR-1mRNA的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测K562细胞上清液中VEGF的浓度。结果1、倒置显微镜显示随实验组药物浓度增加及作用时间的延长,K562细胞数目减少。细胞碎片增多,K562细胞出现核碎裂等凋亡形态学改变。2、MTT法检测结果表明,半枝莲提取物在较低浓度（0.1mg/ml,0.2mg/ml）作用较短时间（24h）时,对K562细胞的增殖抑制不明显,与空白对照组相比无统计学意义（p>0.05）。在半枝莲提取物0.5mg/ml作用24h开始,对K562细胞有明显的抑制作用,与空白对照组相比（p<0.05）,有统计学意义。且随着药物浓度的升高,及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势,各组间比较（p<0.05）,有统计学意义。3、流式细胞仪结果显示,半枝莲提取物可以使K562细胞周期分布发生改变,表现为Go/G1期细胞比例上升,S期及G2/M期细胞比例下降。且随实验组药物浓度增加,K562细胞Go/G1期细胞比例呈逐渐上升趋势,而S期及G2/M期细胞比例为逐渐下降趋势；并且流式细胞仪显示,随实验组药物浓度升高及作用于K562细胞的时间延长,细胞凋亡率逐渐升高,且均高于空白对照组,各组间比较有统计学意义（p<0.05）。4、RT-PCR显示不同浓度半枝莲提取物作用于K562细胞48h后均可降低VEGFmRNA及VEGFR-1mRNA的表达,目的基因与β-actin灰度比值逐渐下降,并有一定的浓度依赖趋势,各组间比较有统计学意义（p<0.05）。在0.2mg/ml组时电泳条带较空白对照组明显变浅,1.0mg/ml组较其余各组比较条带最浅。5、ELISA法结果显示空白组K562细胞上清液中VEGF的浓度为996.78±14.76pg/ml,各组半枝莲提取物（0.1mg/ml,0.2mg/ml, 0.5mg/ml, 1.0mg/ml）作用K562细胞48h后,VEGF浓度分别下降为760.30±9.47pg/ml,709.69±1.23 pg/ml,549.46±8.63 pg/ml,452.78±13.59 pg/ml,各组间比较有统计学意义（p<0.05）。结论（0.1 mg/ml-1.0mg/ml）的半枝莲提取物在（24h-72h）之间能抑制K562细胞的增殖,改变细胞周期分布,使细胞由G0/G1期向S期转变的过程受阻,诱导K562细胞凋亡,并呈一定的浓度及时间依赖趋势。其作用机制可能与降低K562细胞VEGF的浓度和下调VEGFmRNA及VEGFR-1mRNA的表达有关。

论文目录

• 主要缩略语及英文索引
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 硕士期间发表文章
• 致谢