论文摘要
ANGPTL4（angiopoietin-like 4）,血管生成素样基因家族的成员之一,是一个与肿瘤细胞的生长、迁移、浸润和血管生成有密切关系的基因。本实验室的前期研究结果也表明,ANGPTL4可以抑制肝癌细胞BEL-7402和SMMC-7721的体外克隆形成和在裸鼠体内的成瘤。本研究用RT-PCR的方法对ANGPTL4基因在九种不同来源肝细胞中的mRNA表达水平进行了检测,发现ANGPTL4在肝癌细胞Hep3B中相对高表达,在BEL-7402和MHCC-97L细胞中中度表达,而在肝癌细胞Huh-7和MHCC-LM3以及Chang’s liver中低表达。本研究选择ANGPTL4低表达的Huh-7、MHCC-LM3和中度表达的MHCC-97L细胞,用脂质体转染法及利用G418筛选和结合流式细胞仪对转染阳性细胞进行了分选,构建了Huh-7、MHCC-LM3和MHCC-97L三个稳定过表达ANGPTL4的肝癌细胞系,并用裸小鼠体内成瘤实验观察了ANGPTL4对这三个细胞系的生长的影响,发现ANGPTL4可以明显抑制Huh-7细胞的裸鼠体内成瘤（P=0.001）,而促进MHCC-97L细胞（P=0.019）和MHCC-LM3细胞的裸鼠体内成瘤（P=0.058）。为了探讨野生型ANGPTL4影响Huh-7、MHCC-97L和MHCC-LM3肝癌细胞生长的机制,我们通过cDNA芯片对稳定过表达ANGPTL4的Huh-7、MHCC-97L和MHCC-LM3细胞进行了基因表达谱检测,并用荧光定量RT-PCR方法进行了验证。另外,本研究还对意外发现第646位核苷酸存在点突变的ANGPTL4（由T突变为C,编码的氨基酸由半胱氨酸变为精氨酸）全长基因及带有该点突变的两个缺失突变体和一个不带该点突变的缺失突变体与ANGPTL4全长对肝癌细胞MHCC-97L生长的影响进行了对比研究,结果表明ANGPTL4可以促进MHCC-97L肝癌细胞在裸小鼠体内的成瘤（P=0.019）,而第646位碱基突变后,ANGPTL4蛋白的表达虽还是定位于细胞质内,与前期研究结果一致,但ANGPTL4基因及带点突变的两个缺失突变体和一个不带该点突变的缺失突变体对肝癌细胞MHCC-97L的生长却无明显影响（P＞0.05）。
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