本文主要研究内容
作者陈晓仪（2019）在《川贝母生物碱测定及其合成关键酶基因克隆与表达》一文中研究指出：目的川贝母(Fritillaria cirrhosa D.Don)作为药食同源植物,不仅可以作为食品食用,也可以作为药用目的。为了保证川贝母食用、药用安全,对其进行质量控制研究,进一步为严格控制川贝母药材质量打下基础,从而保证食用安全。方法利用HPLC-ELSD检测手段测定1-2年与3-4年野生川贝母药材中的西贝母碱(Imperialine)、贝母素甲(Peimine)和贝母素乙(Peiminine)的含量,为川贝母生物碱代谢工程供给了材料拣选的依据。以从原产地康定折多山野生抚育基地采撷的野生川贝母药材鳞茎为材料,利用聚合酶链反应(PCR)技术克隆卷叶贝母HMGR基因(FcHMGR)的全长cDNA和CAS基因(FcCAS)开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并基于在线工具对FcHMGR和FcCAS序列进行生物信息学分析。通过荧光定量(qRT-PCR)手段检测1-2年与3-4年野生鳞茎cDNA样本中FcCAS和FcHMGR相对含量。此外,还利用原核表达体系对HMGR进行了酶活测定。结果1不同年限(1-2年与3-4)年野生川贝母的生物碱含量数据分析发现,3-4年野生川贝母生物碱含量的积累较高,推测可能与其合成的基因表达水平有关。2针对随着年限的增长,生物碱积累越高这一现象,本研究克隆了两个与生物碱合成相关的基因:HMGR和CAS。(1)FcHMGR基因全长为2072bp,包含一个1680bp的完整开放阅读框,编码559个氨基酸。同源性与氨基酸保守结构域结果显示,该蛋白具有HMGR活性必需的典型多肽位,实时荧光定量PCR结果显示,FcHMGR在3-4年野生川贝母鳞茎中表达量更高。SDS-PAGE剖析显示,FcHMGR基因在表达感受态细胞BL21中可以表达,并且它是可融合的蛋白质。FcHMGR酶活检测表明FcHMGR是一个具有功能性的蛋白。(2)FcCAS编码区ORF长为2 271 bp,编码756个氨基酸,并与NCBI上公布的天门冬、芭蕉、油棕等植物CAS蛋白的相似性达80%以上;qRT-PCR实验表明FcCAS在3-4年野生川贝母鳞茎中表达水平高于1-2年生。结论川贝母生物碱随着年限的增长而呈现含量越多的现象可能与其合成相关基因的高表达呈正相关,进一步分析这些基因的克隆和功能,为卷叶贝母生物碱含量和表达调控的研究奠定了基础。
Abstract
mu de chuan bei mu (Fritillaria cirrhosa D.Don)zuo wei yao shi tong yuan zhi wu ,bu jin ke yi zuo wei shi pin shi yong ,ye ke yi zuo wei yao yong mu de 。wei le bao zheng chuan bei mu shi yong 、yao yong an quan ,dui ji jin hang zhi liang kong zhi yan jiu ,jin yi bu wei yan ge kong zhi chuan bei mu yao cai zhi liang da xia ji chu ,cong er bao zheng shi yong an quan 。fang fa li yong HPLC-ELSDjian ce shou duan ce ding 1-2nian yu 3-4nian ye sheng chuan bei mu yao cai zhong de xi bei mu jian (Imperialine)、bei mu su jia (Peimine)he bei mu su yi (Peiminine)de han liang ,wei chuan bei mu sheng wu jian dai xie gong cheng gong gei le cai liao jian shua de yi ju 。yi cong yuan chan de kang ding she duo shan ye sheng fu yo ji de cai xie de ye sheng chuan bei mu yao cai lin jing wei cai liao ,li yong ju ge mei lian fan ying (PCR)ji shu ke long juan xie bei mu HMGRji yin (FcHMGR)de quan chang cDNAhe CASji yin (FcCAS)kai fang yue dou kuang (open reading frame,ORF)xu lie ,bing ji yu zai xian gong ju dui FcHMGRhe FcCASxu lie jin hang sheng wu xin xi xue fen xi 。tong guo ying guang ding liang (qRT-PCR)shou duan jian ce 1-2nian yu 3-4nian ye sheng lin jing cDNAyang ben zhong FcCAShe FcHMGRxiang dui han liang 。ci wai ,hai li yong yuan he biao da ti ji dui HMGRjin hang le mei huo ce ding 。jie guo 1bu tong nian xian (1-2nian yu 3-4)nian ye sheng chuan bei mu de sheng wu jian han liang shu ju fen xi fa xian ,3-4nian ye sheng chuan bei mu sheng wu jian han liang de ji lei jiao gao ,tui ce ke neng yu ji ge cheng de ji yin biao da shui ping you guan 。2zhen dui sui zhao nian xian de zeng chang ,sheng wu jian ji lei yue gao zhe yi xian xiang ,ben yan jiu ke long le liang ge yu sheng wu jian ge cheng xiang guan de ji yin :HMGRhe CAS。(1)FcHMGRji yin quan chang wei 2072bp,bao han yi ge 1680bpde wan zheng kai fang yue dou kuang ,bian ma 559ge an ji suan 。tong yuan xing yu an ji suan bao shou jie gou yu jie guo xian shi ,gai dan bai ju you HMGRhuo xing bi xu de dian xing duo tai wei ,shi shi ying guang ding liang PCRjie guo xian shi ,FcHMGRzai 3-4nian ye sheng chuan bei mu lin jing zhong biao da liang geng gao 。SDS-PAGEpou xi xian shi ,FcHMGRji yin zai biao da gan shou tai xi bao BL21zhong ke yi biao da ,bing ju ta shi ke rong ge de dan bai zhi 。FcHMGRmei huo jian ce biao ming FcHMGRshi yi ge ju you gong neng xing de dan bai 。(2)FcCASbian ma ou ORFchang wei 2 271 bp,bian ma 756ge an ji suan ,bing yu NCBIshang gong bu de tian men dong 、ba jiao 、you zong deng zhi wu CASdan bai de xiang shi xing da 80%yi shang ;qRT-PCRshi yan biao ming FcCASzai 3-4nian ye sheng chuan bei mu lin jing zhong biao da shui ping gao yu 1-2nian sheng 。jie lun chuan bei mu sheng wu jian sui zhao nian xian de zeng chang er cheng xian han liang yue duo de xian xiang ke neng yu ji ge cheng xiang guan ji yin de gao biao da cheng zheng xiang guan ,jin yi bu fen xi zhe xie ji yin de ke long he gong neng ,wei juan xie bei mu sheng wu jian han liang he biao da diao kong de yan jiu dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自成都大学的陈晓仪，发表于刊物成都大学2019-10-16论文，是一篇关于川贝母论文,基因克隆论文,荧光定量论文,成都大学2019-10-16论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自成都大学2019-10-16论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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