血浆同型半胱氨酸水平，亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与强直性脊柱炎的相关性研究

论文摘要

研究背景:同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）是DNA甲基化修饰代谢的中间产物,其异常升高很可能影响DNA的甲基化过程,并进而影响某些基因的表达而促进疾病的发生发展。亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是促使Hcy转化的关键酶,在叶酸和Hcy代谢、DNA甲基化和DNA合成等方面起重要作用。体内外研究表明,慢性叶酸或甲基缺乏与DNA甲基异常有关,并会造成DNA链断裂、染色体重组改变和染色体分离异常。已有研究显示:高Hcy血症可能导致基因组DNA低甲基化,而诱发某些风湿免疫性疾病的产生。目前尚无强直性脊柱炎患者Hcy与基因组DNA甲基化水平的报道。研究目的:检测强直性脊柱炎（AS）患者Hcy水平,探讨血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平与AS间的联系;分析AS患者MTHFR基因C677T突变的多态性,探讨MTHFR基因多态性与AS的相关性,以寻求Hcy,MTHFR基因多态性及去甲基化在AS中可能的发病机制。研究方法:运用酶联免疫吸附法测定100例AS患者及60名正常人血浆Hcy浓度,应用多聚酶链反应—限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）分析MTHFR基因的多态性。对有突变碱基的标本进行DNA测序分析。结果:①AS患者血浆Hcy浓度（17.91+/-3.17μmol/L）明显高于对照组（11.97+/-2.14μmol/L）,两组间差异有统计学意义（t′=14.121,P＜0.001）。②AS组MTHFR C/C型、C/T型基因频率分布与对照组比较无显著性差异(XC/C2=1.508,XC/T2=0.067,P＞0.05)。③AS组MTHFR C、T等位基因频率与对照组比较无显著差异（X2=3.008,P＞0.05）。④As组MTHFR T/T型基因频率分布与对照组比较有显著差异(17%VS5%,XT/T2=4.937,P＜0.05)。⑤AS组的MTHFR C/C、C/T、T/T基因型的Hcy水平均高于对照组的相同基因型(tC/C=8.042:t（C/T）=8.315;tT/T=9.450,P＜0.001);AS组和对照组MTHFRT/T型的血浆Hcy水平明显高于同组内MTHFR C/C型和MTHFR C/T型（t=10.279,P＜0.001）,而同组内MTHFR C/C型与MTHFR C/T型Hcy的水平比较无显著差异（t=2.712,P＞0.05）⑥Logistical回归分析显示高Hcy血症是AS发病的独立危险因素（P＜0.001,OR=4.582,95%CI=1.984-10.585）。⑦PCR产物测序结果证实酶切分析的方法准确,结果可信。结论:AS患者血浆Hcy浓度明显高于正常人,高Hcy血症是AS发病的独立危险因素。MTHFR基因T/T型突变是血浆Hcy浓度升高的一个重要影响机制,MTHFR基因T/T型突变可能与AS的发生有相关性。AS患者的高Hcy血症是否可导致某些DNA的低甲基化,以及Hcy对AS患者的MTHFR基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响,有待进一步的研究。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 对象、材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 材料
• 2.3 方法
• 2.4 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 血浆Hcy浓度比较
• 3.2 MTHFR-C667T多态性的分析
• 3.3 各基因型血浆Hcy浓度比较
• 3.4 AS危险因素的多元Logstic逐步回归分析
• 第四章 讨论
• 4.1 早期发现AS病人血浆Hcy浓度改变的重要性
• 4.2 AS患者MTHFR基因突变与血浆Hcy浓度改变的关系
• 4.3 AS患者MTHFR基因突变与AS发生的相关性
• 4.4 AS患者高Hcy血症与DNA甲基化的关系
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果