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不同免疫状态下猪PRRSV感染免疫应答作用及T淋巴细胞表型变化的研究

2020-12-26阅读(357)

不同免疫状态下猪PRRSV感染免疫应答作用及T淋巴细胞表型变化的研究

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）引起的。主要以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病为主要特征的高度接触性、高致死率烈性传染病。自美国1987年报道以来,近年来已经遍布全球各个主要养猪国家,是被国际兽医局（OIE）通报的动物烈性传染病之一,为高发病率和高死亡率的重大传染病,每年给养猪业带来巨大的经济损失。本研究采用猪瘟脾淋苗免疫无特定病原体的猪只,并建立猪体不同免疫状态模型,然后感染PRRSV,并在不同时间检测动物外周血内T淋巴细胞亚群变化情况。根据检测结果,对CSFV和PRRSV的感染／免疫的相互关系进行研究,深入探讨抗PRRSV的免疫应答保护机理,从而对设计有效的PRRSV疫苗以及有效控制PRRS的流行提供重要的理论和应用意义。本实验室设计试验,取与本实验合作猪场采取的380份血液样品进行ELISA和血清中和抗体试验,确定了58头CSFV、PRRSV抗体阴性断奶仔猪。将选择的58头CSFV、PRRSV抗体阴性断奶仔猪进的血液样本又进行CSFV、PRRSV、PRV和PCV-2病毒的检测,确定21头为符合本试验要求的猪,从中选择了20头作为研究对象。根据抗体检测结果和PRRSV、CSFV、PCV-2和PRV四种病毒检测结果,将最终确定的20头CSFV抗体阴性和PRRSV抗体阴性猪作为研究对象,随机分为4组（分别为：A组、B组、C组和D组）,隔离饲养。将A和B两组按照常规剂量进行猪瘟病毒脾淋苗的免疫。免疫后第7d,对B和D两组进行PRRSVBJ-4弱毒株通过滴鼻的方式攻毒,并分别在攻毒后第Od、第7d、第14d、第21d、第28d采集血液样本,流式细胞术检测猪外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD4-CD8-和CD4+CD8+细胞表型的变化,用SPASS 13.0软件进行数据分析。流式细胞术检测结果表明,试验组无论是否获得CSFV疫苗免疫保护,猪体感染PRRSV后,均使CD3+细胞亚群百分数出现在感染急性期先是出现急剧上升,后又明显下降的趋势；CD4+、CD8+细胞亚群比例在感染急性期均急剧下降,CD8+下降时间较CD4+细胞滞后,差异极显著（P<0.01）：感染PRRSV组的CD4++CD8+细胞亚群总数较低（P<0.05）；CD4+/CD8+细胞比率在机体免疫状态与抗PRRSV感染力方面有明显意义,感染急性期,比值急剧下降,未达到机体免疫能力保护比值,只有该比值接近1时,猪体才能建立正常的免疫应答能力并对PRRSV抵抗；提示,在感染急性期,猪体外周免疫系统首先受到抑制,使CD3+细胞分化障碍,细胞百分比在体内一定时间内升高,健康机体T细胞处于活跃状态,而感染导致T细胞活动抑制,细胞清除病毒能力降低,防御外界病毒或者入侵的功能下降。未获得CSFV疫苗免疫保护的对PRRSV易感的猪体CD4+CD8+频数略高于非易感猪；CD4-CD8-频数略高,提示T细胞机能低下。免疫CSFV疫苗的感染PRRSV与未免疫CSFV疫苗感染PRRSV试验猪相比,CD3+细胞百分数变化程度更剧烈；CD4+、CD8+细胞亚群百分数下降程度更低,差异显著（P<0.05）；CD4+CD8+、CD4-CD8-细胞亚群百分数升高明显；CD4+/CD8+比值更低,差异极显著（P<0.01）；感染后机体出现免疫抑制现象提前,抑制作用加强。提示获得CSFV疫苗免疫保护作用的试验猪,机体特异性免疫增强,对抗PRRSV感染有一定的保护作用。本研究首次运用CSFV免疫理想状态下感染PRRSV的动物模型,通过实验证明了加强猪体的免疫力可以增加猪对PRRSV的耐受力；得到了我们试验预期的CSFV免疫理想的猪可以对PRRS提供一定的免疫保护作用的结论；提示,全面加强猪体对PRRSV的特异性免疫,特别是细胞免疫,对预防PRRSV感染有很大帮助。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 目录
  • 英文缩写词表
  • 引言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 猪繁殖与呼吸综合征的免疫学研究进展
  • 1 细胞免疫
  • 2 体液免疫
  • 3 天然免疫
  • 4 抗体依赖性增强作用（ADE）
  • 5 免疫病理学
  • 6 疫苗研究
  • 第二章 CD4、CD8 T细胞免疫和PRRSV感染
  • 1 CD4、CD8 T细胞的免疫学基础
  • 2 病毒感染和免疫细胞之间的关系
  • +T细胞'>3 病毒感染和CD4+T细胞
  • +和CD8+T细胞'>4 病毒感染细胞后两个主要细胞亚群的T细胞反应:病毒特异性CD4+和CD8+T细胞
  • +T细胞辅助CD8+T细胞依赖性抗病毒防御'>5 CD4+T细胞辅助CD8+T细胞依赖性抗病毒防御
  • 6 猪外周血中CD4与CD8细胞的特点及与PRRSV感染之间的关系
  • 第二篇 研究内容
  • 第一章 PRRSV/CSFV抗体阴性猪和无特定病原体动物的筛选
  • 1 材料与试剂
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 5 小结
  • 第二章 CSF不同免疫状态下CD4、CD8T淋巴细胞亚群分析及对PRRS保护作用的关系
  • 1 材料和试剂
  • 2 方法
  • 3 结果
  • 4 讨论
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 导师简介
  • 作者简介
  • 致谢

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