桦褐孔菌多糖的提取及功能的初步研究

论文摘要

桦褐孔菌（lnonotus obliquus）是90年代新兴的一种食药兼用菌,富含多种生物活性成份。目前,国外关于桦褐孔菌多糖免疫活性的研究不多,而国内尚未见这方面的报道。本文以桦褐孔菌子实体为材料提取粗多糖,研究不同因素对多糖浸提的得率和纯度的影响,最终通过正交确定了最佳多糖提取条件。以提取得粗多糖为原料研究了其对机体免疫功能的影响。采用碳粒廓清实验研究了桦褐孔菌多糖对正常和免疫力低下小鼠的非特异性免疫功能中巨噬细胞吞噬功能的影响;通过淋巴细胞增殖实验研究了桦褐孔菌多糖对正常和免疫力低下小鼠的细胞免疫功能的影响;通过血清溶血素(HC50)测定法研究桦褐孔菌多糖对小鼠体液免疫功能的影响。测定了桦褐孔菌的水分、灰分、蛋白和粗脂肪含量以及微量元素和重金属的含量,为桦褐孔菌的研究与开发提供了前期研究基础。实验结果如下:（1）通过传统方法用热水浸提桦褐孔菌中的粗多糖,由正交优化实验得出了最佳提取条件。桦褐孔菌多糖热水浸提的最佳工艺参数为:料水比为1:25,提取时间为4 h,提取温度为100℃,此工艺条件下的桦褐孔菌多糖的得率可达1.841%。（2）桦褐孔菌粗多糖能显著提高低免疫模型的机体脾指数和巨噬细胞吞噬率,增强机体非特异性免疫功能。（3）能显著刺激淋巴细胞转化,表明桦褐孔菌粗多糖是一种T淋巴细胞激活剂,使机体细胞免疫水平提高。（4）能显著增加循环抗体-溶血素的含量,刺激机体产生抗体的能力,使体液免疫水平上升。（5）该粗多糖与环磷酰胺（CTX）共用,在适宜剂量条件下,有弱化甚至完全消除该环磷酰胺造成的免疫功能低下的作用,并调节机体免疫水平至正常。（6）桦褐孔菌原料中含有有益的微量元素锰和硒,并且重金属含量均远低于行业标准,不会对人体造成伤害。本项研究表明:桦褐孔菌粗多糖是较好的免疫增强剂,该研究结果为其在医药保健方面的开发利用提供了理论依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 桦褐孔菌概述
• 1.1.1 桦褐孔菌的分类地位
• 1.1.2 桦褐孔菌的形态特征及分布
• 1.1.3 桦褐孔菌的生物学特性
• 1.2 桦褐孔菌的化学成分及药理作用
• 1.2.1 桦褐孔菌的主要药用成分
• 1.2.2 药理作用
• 1.3 桦褐孔菌多糖的药理作用
• 1.3.1 降血糖的作用
• 1.3.2 多糖清除羟自由基活力
• 1.3.3 桦褐孔菌多糖对过氧化脂质生成的抑制
• 2+-Cys诱导小鼠肝脂质过氧化的抑制'>1.3.4 对 Fe²⁺-Cys诱导小鼠肝脂质过氧化的抑制
• 1.3.5 桦褐孔菌多糖对小鼠肝线粒体肿胀的抑制
• 1.3.6 桦褐孔菌多糖对实验性高脂血症模型大鼠血脂的影响
• 1.3.7 增强免疫和抗氧化作用
• 1.4 多糖对机体免疫功能的影响
• 1.4.1 多糖对免疫器官的影响
• 1.4.2 多糖对淋巴细胞的影响
• 1.4.3 对T淋巴细胞的影响
• 1.4.4 对B淋巴细胞和抗体生成的形响
• 1.4.5 多糖的抗炎症、抗病毒、抗衰老等其它活性
• 1.5 多糖生物活性的影响因素
• 1.5.1 多糖的化学结构
• 1.5.2 多糖的分子量
• 1.5.3 多糖的溶解度和粘度
• 1.5.4 多糖的来源
• 1.5.5 使用剂量与给药途径
• 1.6 国内外食用菌多糖的研究进展
• 1.6.1 食用菌多糖研究现状
• 1.6.2 真菌多糖的理化性质
• 1.6.3 真菌多糖的提取、分离
• 1.6.4 真菌多糖开发利用
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 热水浸提法
• 2.2.2 碱液提取法
• 2.2.3 多糖含量分析方法（苯酚—硫酸法）
• 2.2.4 总蛋白的测定
• 2.2.5 桦褐孔菌多糖含量计算方法
• 2.3 非特异性免疫研究—免疫器官变化试验
• 2.3.1 评价免疫功能的原理及方法
• 2.3.2 实验的前期准备
• 2.3.3 实验操作
• 2.3.4 计算公式
• 2.3.5 数据处理
• 2.4 体外脾细胞培养
• 2.4.1 淋巴细胞增殖实验原理
• 2.4.2 实验的前期准备
• 2.4.3 实验操作
• 2.4.4 数据处理
• 2.5 体液免疫功能—溶血素的测定原理
• 2.5.1 实验动物及材料
• 2.5.2 实验操作
• 2.5.3 计算公式
• 2.5.4 数据处理
• 2.6 测定新鲜桦褐孔菌初始特性指标的方法
• 2.6.1 桦褐孔菌水分测定的方法
• 2.6.2 桦褐孔菌脂肪含量测定的方法
• 2.6.3 桦褐孔菌灰分含量测定的方法
• 2.6.4 桦褐孔菌中微量元素和重金属元素的测定
• 3 结果分析与讨论
• 3.1 苯酚—硫酸法测定条件的确定
• 3.1.1 最大吸收波长的选择
• 3.1.2 显色时间的确定
• 3.1.3 葡萄糖标准曲线
• 3.2 热水漫提工艺条件的确定
• 3.2.1 单因素实验结果及分析
• 3.2.2 正交实验结果与分析
• 3.3 桦褐孔菌中蛋白质的测定结果
• 3.3.1 蛋白质标准曲线
• 3.3.2 蛋白质的测定结果
• 3.4 碳粒廓清实验
• 3.4.1 桦褐孔菌多糖对小鼠胸腺指数、脾指数和肝指数的影响
• 3.4.2 桦褐孔菌多糖对巨噬细胞吞噬功能的影响
• 3.4.3 讨论
• 3.5 淋巴细胞增殖实验结果
• 3.5.1 桦褐孔菌多糖对淋巴细胞增殖的直观影响
• 3.5.2 水提桦褐孔菌多糖对正常小鼠体外淋巴细胞转化的影响
• 3.5.3 水提桦褐孔菌多糖对低免小鼠体外淋巴细胞转化的影响
• 3.5.4 碱提桦褐孔菌多糖对正常小鼠体外淋巴细胞转化的影响
• 3.5.5 碱提桦褐孔菌多糖对低免小鼠体外淋巴细胞转化的影响
• 3.5.6 多糖对提高细胞免疫水平的探讨
• 3.6 血清溶血素实验结果
• 3.7 桦褐孔菌初始特性指标测定结果
• 3.7.1 桦褐孔菌水分的测定结果
• 3.7.2 桦褐孔菌中粗脂肪含量的测定结果
• 3.7.3 桦褐孔菌中灰分的测定结果
• 3.7.4 桦褐孔菌中微量元素的测定结果
• 4 结论
• 5 展望
• 6 参考文献
• 7 攻读硕士期间发表论文情况
• 8 致谢