Ebp1与食管癌和贲门癌发生发展及预后关系的研究

论文摘要

在世界范围内,食管癌的高发区包括:中国（21/10万人）,南美（13/10万人）,西欧（11/10万人）,南非（10/10万人）,日本（9/10万人）和前苏联地区（8/10万人）。从90年代以来,某些危险因素得到有效的干预和改善后,河南省食管癌发病率和死亡率呈缓慢下降趋势,但仍明显高于全国平均水平。食管癌和贲门癌从发病到晚期是一个漫长的演变过程,了解这一点将对早期诊断和正确掌握治疗时机颇有裨益,而且能提高食管癌和贲门癌的治疗率和生存率。因而,早诊早治以提高食管癌病人的五年生存率成为目前研究的重要课题。随着分子生物学的发展以及各种分子实验方法的完善和成熟,PCR、western blotting以及免疫组织化染色法等技术已比较成熟,为我们从分子水平研究食管癌和贲门癌提供了良好的条件。Ebp1是近年发现的一种新型蛋白质,为表皮生长因子受体erbB-3胞内近膜区结合蛋白,是增殖相关PA2G4家族中的一员,与细胞周期、蛋白质转录翻译相关,参与多个信号传导通路,影响细胞增殖、分化。目的检测Ebp1基因在食管癌和贲门癌原发灶及匹配正常食管和贲门组织中的mRNA和蛋白水平及与临床病理参数关系,并且对食管癌和贲门癌患者进行了术后随访,研究Ebp1基因对病人预后的影响。材料与方法1.对象选择、组织样本的采集与患者临床资料的收集选取2003年至2006年在郑州大学第一附属医院和林州市肿瘤医院就医的食管癌和贲门癌患者作为研究对象,采集手术后患者食管癌与贲门癌原发灶及其匹配的正常食管组织有效标本（经病理学鉴定）220对和120对。标本离体后立即放入液氮中,后放在-80℃冰箱中冷冻保存。收集病人的性别、年龄、家族史、淋巴结转移、病理类型、肿瘤位置、肿瘤的大小、病理分级、浸润深度以及临床分期等方面临床资料,便于统计分析和研究。2.样本中Ebp1 mRNA水平的测定采用实时荧光定量PCR测定食管癌与贲门癌患者癌组织及匹配的正常组织中Ebp1基因mRNA表达。通过测定样本中目的基因模板的Ct值即循环阈值来反映模板的含量。3.样本中Ebp1蛋白水平的测定通过免疫组织化学染色法测定食管癌和贲门癌患者癌组织及其匹配正常组织中Ebp1蛋白表达水平,每一标本在200倍显微镜下观察3个染色最强的视野,记数阳性细胞数,并计算阳性细胞百分比,每个患者的食管癌和贲门癌组织中阳性细胞百分比与正常食管和贲门组织中阳性细胞百分比比值作为食管癌和贲门癌蛋白表达水平指标。4.生存分析2008年3月-4月期间,对上述使用标本的食管癌与贲门癌患者进行随访,患者手术治疗时刻作为生存的起始事件,随访时间作为观察终止时间,终点事件与起始事件之间的时间间隔定义为患者的生存时间。5.统计学分析运用SPSS12.0统计分析软件对数据进行分析,对每一个组织样本,用△Ct(CtEbpl—Ctβ-actin)值表示目的基因与内参基因β-actin间Ct的差值,△（△Ct）值=△Ct（正常食管或贲门组织）-△Ct（食管癌或贲门癌组织）。对△（△Ct）和蛋白表达采用配对样本t检验。采用x2检验比较220例食管癌与120例贲门癌样本的Ebp1基因mRNA和蛋白的表达水平差异及其与临床参数的关系,非条件Logistic回归分析模型进行多因素分析。绘出Ebp1基因的表达阳性与阴性的食管癌与贲门癌病人Kaplan-Meier生存曲线,采用log-rank（时序检验）来比较两条曲线的差异。采用Cox回归（比例危险率回归模型）分析临床参数与基因表达对生存的影响。以α=0.05作为检验水准。结果1实时荧光定量PCR结果1.1 Ebp1基因在食管癌与贲门癌组织中mRNA表达水平实时荧光定量PCR结果显示:在220例食管癌样品中,与正常食管组织相比,Ebp1有150（68.18%）例表达上调;在120例贲门癌样品中,Ebp1有73（60.83%）例表达下调。配对t检验显示:在食管癌和贲门癌组织中Ebp1基因的mRNA的表达与正常食管和贲门组织相比有统计学差异（t=11.065,P=0.000;t=-3.534,P=0.001）。1.2 Ebp1基因在食管癌与贲门癌组织中的mRNA表达与临床参数之间多因素分析将各因素引入非条件Logistic回归分析模型进行多因素分析,结果表明:在食管癌中家族史、肿瘤大小、病理分级、浸润深度、临床分期均是Ebp1 mRNA表达的危险因素,而病理类型是Ebp1 mRNA表达的保护因素;在贲门癌中年龄、家族史、肿瘤大小、病理分级、临床分期均是Ebp1 mRNA表达的保护因素,而性别是Ebp1 mRNA表达的危险因素。2免疫组化结果2.1 Ebp1基因在食管癌与贲门癌组织中的蛋白表达配对t检验结果显示:Ebp1蛋白在食管癌组织中表达水平均显著高于同一患者正常食管癌组织（t=23.140,P=0.000）,而Ebp1蛋白在贲门癌组织中表达水平均显著低于同一患者正常贲门癌组织（t=32.588,P=0.000）,与real-time PCR结果相一致。2.2食管癌与贲门癌组织中Ebp1蛋白表达水平与临床和病理参数多因素分析将各因素引入非条件Logistic回归分析模型进行多因素分析,结果表明:在食管癌中家族史、淋巴结转移、肿瘤大小、浸润深度、病理分级均是Ebp1蛋白表达的危险因素。在贲门癌中淋巴结转移、病理分级均是Ebp1蛋白表达的保护因素。3.生存分析多因素生存分析（Cox回归分析）表明,影响食管癌患者生存率的独立危险因素是Ebp1mRNA表达、Ebp1蛋白表达、家族史和淋巴结转移,相对危险度分别是2.717（95%CI 1.190～6.200）、2.526（95%CI 1.266～5.040）、1.808（95%CI 1.184～2.760）、2.182（95%CI 1.335～3.565）。未发现性别、年龄、病理类型、肿瘤位置、肿瘤大小、浸润深度、肿瘤分级和临床分期与食管癌患者的生存率有明显的相关性。多因素生存分析（Cox回归分析）表明,影响贲门癌患者生存率的独立危险因素是Ebp1mRNA表达、临床分期、年龄,相对危险度分别是0.198（95%CI 0.085～0.461）、1.429（95%CI1.081～1.890）、1.950（95%CI 1.289～2.950）。未发现性别、家族史、转移病理类型、肿瘤大小、浸润深度、肿瘤分级与贲门癌患者的生存率有明显的相关性。结论1.食管癌组织Ebp1基因的mRNA表达水平均显著高于其同一患者正常食管组织,而贲门癌组织Ebp1基因的mRNA表达水平显著低于其同一患者正常贲门组织。在食管癌中家族史、肿瘤大小、病理分级、浸润深度、临床分期均是Ebp1 mRNA表达的危险因素,而病理类型是Ebp1 mRNA表达的保护因素;在贲门癌中年龄、家族史、肿瘤大小、病理分级、临床分期均是Ebp1 mRNA表达的保护因素,而性别是Ebp1 mRNA表达的危险因素。2.食管癌组织中Ebp1蛋白表达水平均显著高于同一患者正常食管癌组织,贲门癌组织中Ebp1蛋白表达水平均显著低于同一患者正常贲门癌组织,与real-time PCR结果相一致。在食管癌中家族史、淋巴结转移、肿瘤大小、浸润深度、病理分级均是Ebp1蛋白表达的危险因素。在贲门癌中淋巴结转移、病理分级均是Ebp1蛋白表达的保护因素。3.食管癌组织Ebp1高表达患者的平均生存时间显著低于Ebp1低表达的患者,Cox回归分析显示:影响食管癌患者生存率的独立危险因素是Ebp1mRNA表达、Ebp1蛋白表达、家族史和淋巴结转移;贲门癌Ebp1低表达患者的平均生存时间显著低于Ebp1高表达的患者,影响贲门癌患者生存率的独立危险因素是Ebp1mRNA表达、临床分期、年龄。4.Ebp1在食管癌组织的表达高表达、贲门癌中的低表达,可能与食管癌和贲门癌的发生、发展及转移有着密切的关系,并影响着病人的预后。因此Ebp1可作为食管癌与贲门癌病人术后预后的一个评价指标,并可能成为基因治疗的一个作用靶点。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一部分 Ebp1基因在食管癌和贲门癌组织中的表达
• 引言
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 第二部分:Ebp1与食管癌和贲门癌病人预后的关系
• 引言
• 1.对象与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 4.结论
• 参考文献
• 综述 食管癌与贲门癌的研究进展
• 参考文献
• 后记
• 一、已发表和待发表学术论文
• 二、获得奖励
• 三、致谢