金雀异黄素对氯化钴诱导的K562细胞HIF-1α、MDR1表达抑制作用的实验研究

论文摘要

目的:通过观察金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导的人白血病细胞K562低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）及多药耐药基因1（multidrug resistance gene 1,MDR1）表达的影响,探讨gen对MDR的干预机制,为gen逆转白血病MDR的临床应用提供依据。研究对象:人白血病细胞株:K562。方法:低氧模拟剂CoCl2用于模拟细胞低氧环境,实验分为量-效关系组和时-效关系组:前者CoCl2取0、50、100和150μmol/L四个浓度点,培养72h进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72h四个时间点进行检测。gen干预组:①正常对照组②CoCl2 150μmol/L组③C oCl2 150μmol/L加gen 50μmol/L组④CoCl2 150μmol/L加gen 100μmol/L组⑤CoCl2 150μmol/L加gen 200μmol/L组,培养72h检测。分别采用RT-PCR及Western Blot的方法检测HIF-1α及MDR1的mRNA及蛋白表达水平。结果:1、CoCl2可诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,150μmol/L CoCl2作用72h HIF-1α蛋白表达最强,并且其和HIF-1α蛋白表达间呈现出明显的浓度和时间依赖性关系（P <0.01）;而不同浓度及时间的CoCl2对K562细胞HIF-1αmRNA的表达无显著影响（P>0.05）;2、常氧下,K562细胞MDR1基因呈阴性表达,CoCl2可诱导K562细胞MDR1/P-gp表达,并且呈现出明显的浓度和时间依赖性关系（P <0.01）;3、Gen呈明显浓度依赖性的抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白及MDR1/P-gp表达（P <0.01）,对K562细胞HIF-1αmRNA表达无显著影响（P>0.05）;gen的浓度与HIF-1α蛋白及MDR1/P-gp表达呈显著负相关（γ2 =-0.947,-0.992,-0.938,P <0.01）, HIF-1α蛋白表达与MDR1/P-gp表达呈显著正相关（γ2 = 0.935,0.942,P <0.01）。结论:1、CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是CoCl2诱导的低氧情况下,HIF-1αmRNA表达无变化,提示HIF-1αmRNA呈组成型表达;2、CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞MDR1/P-gp的表达;3、Gen呈浓度依赖性抑制K562细胞HIF-1α蛋白及MDR1/P-gp的表达,而对HIF-1αmRNA水平无影响;4、Gen可通过下调HIF-1α蛋白的表达抑制K562细胞MDR1/P-gp的表达。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 2诱导人白血病K562 细胞HIF-1α基因及其蛋白表达的研究'>第一部分 CoCl₂诱导人白血病K562 细胞HIF-1α基因及其蛋白表达的研究
• 1 材料和方法
• 2 实验方法
• 3 结果
• 2诱导人白血病K562 细胞MDR1 基因及其蛋白表达的研究'>第二部分 CoCl₂诱导人白血病K562 细胞MDR1 基因及其蛋白表达的研究
• 1 材料和方法
• 2 实验方法
• 3 结果
• 2诱导的人白血病K562 细胞HIF-1α、MDR1基因及其表达产物的影响'>第三部分 金雀异黄素对CoCl₂诱导的人白血病K562 细胞HIF-1α、MDR1基因及其表达产物的影响
• 1 材料和方法
• 2 实验方法
• 3 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间完成的论文