THP-1巨噬细胞热休克处理对MCP-1和IL-8表达的影响

论文摘要

研究背景:动脉粥样硬化（AS）是一种慢性炎症/免疫性疾病。热休克蛋白（ heat shock protein,HSP）是机体细胞在受到热应激或其它应激状态下合成增多的一类蛋白质,可诱导免疫炎症反应,介导天然及获得性免疫反应。近来很多报道显示HSP与动脉粥样硬化的程度呈正相关。主要以HSP60、HSP70、HSP90和小分子HSP与心血管疾病的发生发展密切相关,其中对HSP60与AS之间的关系研究较多,而对HSP70在AS中的作用正日益引起人们的重视。最近又有研究发现,HSP70也可能作为TLR4的内源性配体参与TLRs信号传导机制,从而诱导免疫应答,在免疫/炎症性疾病的发生、发展中起着重要作用。HSP70和TLR4受体均是古老而重要的蛋白,均能介导免疫/炎症反应,诱导炎性介质（IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8、MCP-1）等产生。其中,IL-8可以同MCP-1一样促使外周血单核细胞向血管内皮细胞黏附,并迁移至内皮下,吞噬脂质转化成为泡沫细胞,导致血管平滑肌细胞异常增殖,参与AS发生的病理过程。而本研究意在从热休克出发,探讨对THP-1巨噬细胞表达MCP-1和IL-8的可能影响。目的:体外模拟热休克的应激状态,探讨热休克刺激产生的HSP70对体外培养THP-1巨噬细胞TLR4/P38MAPK、TLR4/NF-κB信号通路激活后的MCP-1、IL-8表达的影响。方法:在每次实验前用160nmol/L佛波酯孵育THP-1细胞24h,使其诱导分化成巨噬细胞,换无血清培养基后加处理因素。1)常温对照组:THP-1细胞生长于含有10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液中,37℃、5%CO2培养箱中静置培养。再用160nmol/L佛波酯（PMA）孵育THP-1细胞24h,使其诱导分化成巨噬细胞。2)热休克处理组:THP-1巨噬细胞42℃水浴受热1 h,37℃恢复6 h。3)热休克+抗TLR4抗体组:THP-1巨噬细胞加入Anti-TLR4 10ug/ml 2h后42℃水浴受热1 h, 37℃恢复6 h。4)热休克+P38抑制剂组:THP-1巨噬细胞加入P38特异性抑制剂（SB203580）20umol/ml 30min后42℃水浴受热1 h, 37℃恢复6 h。5)热休克+NF-κB抑制剂组:THP-1巨噬细胞加入NF-κB特异性抑制剂（PDTC）30umol/ml 30min后42℃水浴受热1 h, 37℃恢复6 h。6)热休克+抗HSP70抗体组:THP-1巨噬细胞加入anti-HSP70 2ug/ml 2h后42℃水浴受热1 h, 37℃恢复6 h。结果:热休克处理THP-1巨噬细胞能够上调HSP70、TLR4、P38、NF-κBMCP-1和IL-8等表达。加入抗HSP70抗体后均可下调由热休克处理导致的TLR4、p38、NF-κB、MCP-1和IL-8表达升高。加入抗TLR4抗体热休克处理后,HSP70表达无变化,p38、NF-κB、MCP-1和IL-8表达下调。加入p38特异性抑制剂SB203580热休克处理后HSP70表达无变化,TLR4、NF-κB、MCP-1和IL-8表达下调。加入NF-κB特异性抑制剂PDTC热休克后HSP70、TLR4和p38表达无明显变化,MCP-1和IL-8表达下调。结论:1.热休克处理THP-1巨噬细胞后激活TLR4、p38MAPK和NF-κB信号通路、上调MCP-1和IL-8的表达是部分通过HSP70起作用。2.TLR4抗体可以抑制热休克导致的MCP-1和IL-8表达上调被,提示p38和NF-κB两条信号通路活化与TLR4有关。3.使用NF-κB特异性抑制剂PDTC和p38特异性抑制剂SB203580都可以抑制由热休克引起的MCP-1和IL-8表达上调。

论文目录

• 主要英文缩略语索引
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 综述
• 硕士期间发表论文
• 致谢