论文摘要
目的研究乙肝病毒（HBV）X基因及其产物HBx蛋白对肝细胞HL-7702的凋亡和细胞周期的影响,并探讨相关机制。方法用分子克隆方法构建HBV X基因重组质粒pcDNA3-X,将其与空质粒pcDNA3转入HL-7702细胞中,经过G418的筛选构建2株新的细胞株,分别命名为HL-7702-HBx和HL-7702-con。RT-PCR和Western-blot分析证实HL-7702-HBx细胞稳定表达HBV X基因。运用DNA ladder,流式细胞分析和电镜等方法检测这两株细胞的凋亡和细胞周期情况。并通过人类凋亡和细胞周期基因芯片分析这两株细胞凋亡和细胞周期相关基因的差异表达,最后经Real-time PCR和Western-blot进一步验证。结果重组质粒pcDNA3-X转染后经G418筛选,RT-PCR和Western-blot分析结果显示HL-7702-HBx细胞能够稳定表达HBV X基因。DNA ladder,流式细胞分析和电镜观察显示与对照组相比,HL-7702-HBx细胞出现凋亡,并有更多的细胞处于S期。cDNA芯片分析显示一些DNA修复基因（XRCC1,DDB1,etc）和细胞周期点调控相关基因（Cdc47, RAD17,etc）参与了这一过程。cDNA芯片和Real-time PCR结果显示HBx可以上调XRCC1, Cdc47, RAD17 mRNA的表达,而蛋白印迹实验却显示HBx下调这三个基因的蛋白表达。结论通过抑制DNA修复和细胞周期点调控,HBx蛋白可以促进HL-7702肝细胞的凋亡和S期的聚集,从而在乙肝病毒感染所致的炎症,纤维化和癌症过程起关键作用。HBx的这一作用可能是通过转录后调控机制实现的。