大鼠骨髓间充质干细胞的神经诱导分化和颅脑损伤的移植实验研究

论文题目: 大鼠骨髓间充质干细胞的神经诱导分化和颅脑损伤的移植实验研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 外科学

作者: 袁军

导师: 杨天明,惠国桢

关键词: 间充质干细胞,诱导,分化,移植,脑外伤

文献来源: 东南大学

发表年度: 2005

论文摘要: 第一部分:大鼠骨髓间充质干细胞分离培养与扩增目的分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)并观察不同接种密度对BMSCs增殖速度的影响。方法用密度梯度离心+贴壁培养方法,原代培养大鼠股骨BMSCs并以50000/cm2、5000/cm2、500/cm2三种细胞接种密度进行传代,计算并比较三种接种密度细胞对数生长期倍增时间。结果原代培养24h后可见有圆形细胞贴壁,逐渐成长梭形、成纤维样细胞并形成集落。传代后细胞增殖速度增快;不同传代接种密度对应的细胞对数生长期倍增时间分别为:50000/cm2组为30.4h、5000/cm2组为36.1h、500/cm2组为38.2h。500/cm2组细胞对数生长期持续时间最长,细胞平均扩增速度较快。结论应用密度梯度离心+贴壁培养方法可以成功分离纯化BMSCs,在一定范围内低接种密度细胞持续增殖能力较强。第二部分:大鼠骨髓间充质干细胞的神经分化目的探讨神经干细胞条件培养液体外诱导BMSCs分化为神经元样细胞的可行性。方法收集全量换液后第4d的神经干细胞条件培养液,与BMSCs共孵育,观察细胞形态的变化;计数分化为神经元样细胞的百分数;免疫细胞化学染色观察分化细胞NSE、Nestin、GFAP表达情况;对照组为使用DMSO+BHA联合诱导。结果实验组诱导6h后,部分BMSCs逐渐分化为神经元样细胞;24h后分化的神经元样细胞百分数为65±11%、NSE染色阳性细胞百分数为66.5±9.2%,均明显高于对照组,差异有显著性(p<0.05)。结论神经干细胞条件培养液在体外可直接诱导BMSCs分化为神经元样细胞,诱导后细胞存活期明显长于DMSO+BHA联合诱导法。第三部分:骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠颅脑外伤目的研究BMSCs经神经干细胞条件培养液诱导后对大鼠颅脑外伤的治疗作用。方法制备脑外伤模型大鼠,将BMSCs经BrdU标记、神经干细胞条件培养液诱导24h后,注射到模型大鼠损伤灶处,分别在术后4d、1w、2w、4w行NSS评分评价移植大鼠的神经功能恢复情况;免疫组织化学染色了解BrdU阳性细胞在脑组织中的分布情况及NSE、Nestin、GFAP表达情况。结果移植诱导后BMSCs的大鼠术后2w、4w神经运动功能恢复较好,NSS评分分别为5.2±0.8、2.1±0.8,明显低于各个对照组,差异具有显著性(P<0.05);染色可见植入部位有BrdU阳性细胞,相应部位表达NSE、Nestin的细胞增多。结论神经干细胞条件培养液诱导的BMSCs移植可以促进颅脑外伤模型大鼠的神经功能缺失的修复。

论文目录:

一、中文摘要

二、英文摘要

三、绪论

四、文献综述

五、正文

第一部分大鼠骨髓间充质干细胞分离培养与扩增

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分神经干细胞条件培养液诱导骨髓间充质干细胞的神经分化及血清的影响

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠颅脑外伤

材料与方法

结果

讨论

参考文献

图示

附表

结论

发表论文

致谢

发布时间: 2007-06-11

参考文献

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