Genistein联合顺铂对卵巢癌的体内外研究及其作用机制探讨

论文摘要

卵巢癌是危害女性健康的三大妇科恶性肿瘤之一,由于早期诊断困难,手术难以彻底切除,往往需要化疗来延续治疗。虽然目前应用以铂类为主的联合化疗在70%-80%卵巢癌中起作用,但因长期化疗的系统毒性、化疗耐药及停化疗后复发率高等问题,使化疗的使用受到限制。此外,卵巢癌患者常常需行手术切除卵巢,年轻患者常常询问能否补充雌激素以改善因卵巢切除引起的雌激素减少而导致的不适。但以往的研究发现雌激素对卵巢癌细胞株有促进增殖和转移的作用,常常告诉患者尽量不用雌激素替代治疗。因此,人们希望寻找既能改善卵巢癌患者术后因雌激素减少而导致的不适,又能更好的杀死肿瘤细胞、逆转耐药、协同抗癌、降低系统毒性的新药。Genistein是大豆产品中发现的天然异黄酮,已报道其在多种肿瘤中具有化学预防及治疗潜能。许多在体和离体实验已证实genistein对前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌有保护作用。我院也研究发现genistein对绒癌、卵巢癌细胞具有生长抑制作用,但对该药的作用机制及其与化疗药物是否具有协同作用未进行过深入研究。本文旨在研究大豆异黄酮genistein、顺铂及两者联合对卵巢癌SKOV3细胞生长的作用,以及对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响和毒副作用,并探讨其可能的作用机制,评价genistein作为卵巢癌辅助治疗和化学预防新方法的可行性。本论文分为二部分:1.genistein联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响及其与VEGF、u-PA表达的关系;2.genistein联合顺铂对卵巢癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与VEGF、u-PA表达的关系。第一部分Genistein联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响及其与VEGF、u-PA表达的关系目的探讨genistein、顺铂（DDP）及其两者联合对卵巢癌SKOV3细胞形态学、增殖和凋亡的影响及其与VEGF、u-PA mRNA表达的关系。方法光学显微镜下观察不同浓度genistien作用于SKOV3细胞48小时后细胞形态学的变化;MTT法检测不同浓度genistein、DDP及两者联合作用于SKOV324、48、72小时后对细胞增殖的影响;流式细胞仪测定不同浓度genistein、DDP及两者联合作用于SKOV348小时后对细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测不同浓度genistein、DDP及两者联合作用于SKOV3 48小时后细胞VEGF、u-PA mRNA表达的变化。结果MTT示1umol/l的DDP对SKOV3细胞增殖抑制作用较弱,大于等于5umol/L DDP可明显抑制SKOV3细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。5umol/l的genistein对SKOV3细胞生长抑制作用较弱,当浓度达到10μmol/L及以上时,genistein对SKOV3细胞生长抑制作用较对照组明显增强,差异有统计学意义（P＜0.01）,且随着genistein浓度的增加抑制率增加。5μmol/L的DDP联合genistein（5、10、20μmol/L）能显著抑制SKOV3细胞的增殖,两者联合时对SKOV3细胞的抑制作用较单独用药组明显增强,差异有统计学意义（P＜0.01）,两者呈现协同作用。Genistein、DDP及其联合对SKOV3细胞的增殖抑制作用具有一定的时间依赖性和剂量依赖性。不同浓度genistein和DDP作用于SKOV3细胞48小时均可诱导细胞凋亡,在两药联合时诱导细胞凋亡的作用较单独用药更加明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度genistein和DDP作用于SKOV3细胞48小时均可抑制细胞VEGF、u-PA mRNA的表达,两者联合应用时抑制作用强于单独用药,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论genistein联合DDP能抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,诱导细胞分化和凋亡,且具有时间及剂量依赖性,这种作用与VEGF、u-PA的表达有关。第二部分Genistein联合顺铂对卵巢癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与VEGF、u-PA表达的关系目的探讨genistein联合顺铂（DDP）对卵巢癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与VEGF、u-PA表达变化的关系。材料与方法BALB/c裸鼠皮下接种卵巢癌SKOV3细胞,成瘤后随机分为4组:对照组、DDP组、genistein组、genistein+DDP组。观察各组移植瘤生长情况及药物对裸鼠脏器的毒副作用;应用免疫组化观察各组移植瘤VEGF表达的变化;应用RT-PCR检测各组移植瘤VEGF、u-PA mRNA表达的变化;应用Western blot方法检测各组移植瘤VEGF、u-PA蛋白表达的变化。结果顺铂、genistein均能抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,各用药组移植瘤体积及重量均小于对照组,且两药联合时对移植瘤的生长抑制作用强于单独用药,DDP组抑瘤率33.1%,genistein组抑瘤率43.6%,两者联合时抑瘤率达58.7%,差异有统计学意义（P＜0.05）。VEGF、u-PA在卵巢癌移植瘤中均表达,顺铂及genistein均能抑制移植瘤组织VEGF、u-PA mRNA及蛋白的表达,且两者联合用药时对VEGF、u-PA的抑制作用强于各单独用药,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论genistein联合DDP能显著抑制卵巢癌移植瘤的增殖能力,且这种作用与VEGF、u-PA的表达有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 3细胞增殖与凋亡的影响及其与VEGF、u-PA表达的关系'>第一部分 Genistein联合顺铂对卵巢癌SKOV₃细胞增殖与凋亡的影响及其与VEGF、u-PA表达的关系
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 第二部分 Genistein联合顺铂对卵巢癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与VEGF、u-PA表达的关系
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表和待发表的论文和综述
• 综述:Genistein抗卵巢癌作用研究进展
• 参考文献