鸡痘病毒地方分离株的鉴定及致病性研究

论文摘要

鸡痘是危害养鸡业发展的一种重要传染病,发病后成鸡一般不造成死亡,雏鸡死亡率较高,5%-30%不等,黏膜型鸡痘症状较严重,有时可引起较高的死亡率。鸡痘可使病禽生长迟缓,产蛋下降,种禽发病时孵化率降低,若并发其他传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时也可引起大批死亡,死亡率甚至高达40%～50%。目前,世界各国对鸡痘的预防主要是接种鸡痘或鸽痘病毒弱毒活疫苗,在很大程度上降低了鸡痘的发生率。但近些年来,鸡痘的发生率又有增高的趋势,并且症状也比以前的严重,免疫失败的情况也很常见。为了探讨鸡痘病毒是否发生了变异,同时建立比传统的血清学方法更敏感、特异的分子生物学检测方法,我们进行了鸡痘病毒分子遗传学分析及PCR诊断方法的研究。本试验对临床疑似鸡痘的患鸡,进行了病毒的分离、提纯、鉴定、序列分析,建立了对鸡痘病毒的PCR检测方法,并进行了初步应用。本试验首先对5例疑为皮肤型鸡痘的病鸡进行了取样及病毒的分离与鉴定。利用10日龄鸡胚尿囊膜连续传代3次,经病毒分离、病毒致病变效应（CPE）、琼脂扩散反应等,证明所分离的病毒是鸡痘病毒,命名为FPVSD1～5。根据已经发表的鸡痘病毒的C型血凝素基因序列,自行设计引物,FPVSD1～5分离株通过PCR分别扩增出了预期的647bp片段,经过测序、序列比较分析对该基因序列的变异性研究表明:该序列与已经发表的鸡痘基因序列同源性高达100%,没有发生基因变异。又根据鸡痘病毒Hypothetical protein基因序列,设计另外一对引物,通过PCR扩增出了预期的704bp片段,经过测序、序列比较分析对该基因序列的变异性研究表明:该序列与已经发表的鸡痘基因序列同源性高达100%,也没有发生基因变异。再次证明鸡痘病毒基因组保守性较高。利用分离的地方株鸡痘病毒对SPF雏鸡和商品代蛋公雏鸡进行了攻毒实验,结果表明:实验鸡群并未发生严重的鸡痘症状和病理变化。上述实验建立的PCR方法,同时可用于鸡痘病毒的分子生物学诊断。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 引言
• 1.鸡痘病毒概述
• 2.近年来鸡痘暴发情况
• 3.免疫酶技术（immunoenzymet echnic）
• 第二部分 实验内容
• 试验一 鸡痘病毒的分离及鉴定
• 1. 材料
• 1.1 原始病料
• 1.2 鸡痘标准株
• 1.3 鸡胚
• 1.4 血清
• 1.5 细胞培养用溶液
• 1.6 琼扩用试剂
• 1.7 主要仪器设备
• 2. 方法
• 2.1 病毒的增殖
• 2.2 细胞培养
• 2.3 病毒的提纯
• 2.4 鸡痘病毒的鉴定
• 3. 结果与分析
• 4. 讨论
• 实验二 鸡痘病毒C 型血凝素基因和hypothetical protein 基因的遗传变异性研究
• 1. 材料
• 1.1 试验仪器
• 1.2 试剂及病料
• 2. 方法
• 2.1 模板的制备
• 2.2 引物设计
• 2.3 PCR 反应步骤
• 2.4 PCR 的凝胶电泳检测
• 2.5 PCR 产物的纯化
• 2.6 测序
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 试验三 鸡痘病毒PCR 检测方法的建立
• 1. 材料与方法
• 1.1 毒株与试剂
• 1.2 引物设计与合成
• 1.3 模板的制备
• 50的测定'>1.4 TCID₅₀的测定
• 1.5 PCR 反应条件的优化
• 1.6 引物的特异性测定
• 1.7 引物的敏感性测定
• 1.8 FPV 不同分离株的 PCR 检测
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 实验四 FPVSD1分离株对SPF雏鸡和商品代蛋公雏鸡的攻毒实验
• 1. 材料
• 1.1 试剂与仪器
• 1.2 毒株
• 1.3 试验动物
• 1.4 动物分组
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 试验五 FPVSD1 分离株和REV 共感染鸡试验的初步研究
• 1. 材料
• 1.1 试剂与仪器
• 1.2 试验动物
• 1.3 毒株来源
• 2. 方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 第三部分 结论
• 参考文献
• 致谢