论文摘要
目的本课题旨在应用OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓单核细胞来源的树突状细胞（dendritic cells,DCs）制备抗小鼠前胃癌瘤苗,观察该疫苗对小鼠前胃癌的体内抑瘤作用,探讨该方法制备的瘤苗在胃癌免疫治疗中的应用价值,为以后应用于临床抗胃癌治疗打下基础。方法利用贴壁粘附法分离小鼠骨髓单核细胞,并在含10%胎牛血清（FCS）、重组小鼠粒.巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CFS）、重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）的培养体系中诱导培养,以共孵育方式将小鼠前胃癌冻融抗原负载于DCs,并应用OK-432作为DCs的成熟刺激因子,体外控制DCs充分成熟,制备抗胃癌DCs瘤苗,光镜和透射电镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面抗原CD83和CD86的表达情况,并将瘤苗从荷瘤小鼠尾静脉内注入,观察其对小鼠前胃癌的免疫治疗效果。结果1小鼠骨髓单核细胞在含10%FCS、rmGM-CFS和rmIL-4的培养体系中培养至第七天即分化成为表型、形态正常的未成熟DCs（Immature DCs,imDCs）。2肿瘤冻融抗原组和OK-432联合肿瘤冻融抗原组的DCs表面抗原CD83和CD86表达均比未刺激组明显上调（P＜0.01）,电镜下具备典型的成熟DCs形态特征;OK-432联合肿瘤冻融抗原组DCs的CD83和CD86表达均高于肿瘤冻融抗原组（P＜0.05）,细胞形态更为成熟。3经肿瘤冻融抗原负载后的DCs瘤苗和经OK-432联合肿瘤冻融抗原冲击的DCs瘤苗能明显延缓荷瘤小鼠前胃癌细胞的生长,抑瘤率明显高于未刺激组（P＜0.01）;OK-432联合肿瘤冻融抗原组体内抑瘤作用高于肿瘤冻融抗原组（P＜0.05）。结论1 OK-432和/或肿瘤冻融抗原能诱导小鼠骨髓来源的imDCs分化为成熟的DCs,OK-432和肿瘤冻融抗原联合应用促成熟效果更好,该肿瘤疫苗制备方法具有方法简单、成本较低、培养时间短和抗肿瘤活性高等优点,也为制备其他类型肿瘤DCs瘤苗提供实验依据。2静脉注射上述DCs瘤苗可明显抑制荷瘤小鼠前胃癌的生长,该肿瘤免疫治疗方案具有临床应用参考价值。
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