论文摘要
1背景与目的肺癌为全球第一大恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌（NSCLC）占80%以上,多数患者发现时已属于晚期,失去了手术根治的机会,且临床上以化放疗为主的常规治疗对NSCLC敏感性较差。然而肺癌组织血管丰富,肿瘤血管抑制剂在肺癌治疗中具有一定优势而备受人们瞩目。茶叶具有化痰、解毒功能,在药食同源、药证对应中医理论指导下,将其“化痰与解毒”功能拓展用于恶性肿瘤的临床与实验研究中,发现其主要生物活性成分茶多酚（TP）能够选择性地抑制肿瘤血管生成。为进一步研究茶多酚抗肺癌的效应与机制,探究其对肺癌新生血管生成关键转录因子及其信号通路的影响,我们开展了一系列体外、体内实验,观察茶多酚对NSCLC细胞系以及小鼠肺癌移植瘤的影响,并以NF-κB、AP-1及其通路为主线,研究茶多酚抗NSCLC血管生成的可能靶点。2方法体外实验部分,通过Methylene Blue法检测TP及其主要成分EGCG对NSCLC细胞生长的抑制作用,并观察TP对KB-MDR多药耐药细胞生长的影响,探究其是否产生或逆转多药耐药；同时采用Luciferase Reporter System研究茶多酚对NF-κB信号通路、AP-1信号通路、TLR-2信号通路、TLR-4信号通路和Nrf2信号通路等的影响。体内实验部分,建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,以血管生成抑制剂沙利度胺为对照,将48只荷瘤小鼠随机分入模型对照组（相同容量的生理盐水）、沙利度胺组（76mg/kg/d）、TP低剂量组（112.5mg/kg/d）、TP高剂量组（337.5mg/kg/d）、TP低剂量联合沙利度胺组（112.5mg/kg/d+76mg/kg/d）以及TP高剂量联合沙利度胺组（337.5mg/kg/d+76mg/kg/d）6个组,连续灌胃给药10天,观察各组移植瘤生长情况,并以免疫组化法检测NF-κB、COX-2、Survivin. Akt-2、C-Jun、MMP-2、TIMP-2等肿瘤血管生成相关因子的表达水平,以探讨TP抗肺癌血管生成的可能信号传导通路及靶点。3结果实验结果显示：（1）TP抑制NCI-H1299、NCI-H522.A549和EKVX细胞系生长的IC50分别为11.8±2.5μg/ml.26.1±5.6μg/ml.61.5±12.7μg/ml和9.4±0.9μg/ml;EGCG抑制NCI-H1299.NCI-H522.A549和EKVX细胞系生长的IC50分别为20.4±5.2μM、51.3±12.7μM、117.5±28.8μM和20.0±4.7μM；（2）TP抑制KB与KB-MDR细胞生长的1C50分别为33.5±7.8μg/ml.33.3±4.9μg/ml,EGCG抑制KB与KB-MDR细胞生长的IC50分别为46±11μM.60.0±14μM,它们对KB与KB-MDR细胞生长抑制作用无差别（P>0.05）；同时加入TP或EGCG均未能逆转KB-MDR（?）细胞株对Taxol的耐药性；（3）TP抑制TNF-α激活的NF-κB信号通路的IC50为51μg/ml抑制TPA激活的AP-1信号通路的1C50为18μg/ml,TP抑制PGN激活的TLR-2信号通路的IC50为83μg/ml,TP抑制LPS激活的TLR-4信号通路的IC50为78μg/ml,对Nrf-2和Ubiquitin信号通路未见明显影响；（4）与模型对照组相比,TP高剂量联合沙利度胺组移植瘤的瘤重显著降低（P<0.05）,其抑瘤率约44.32%;（5）与模型对照组相比,TP高剂量联合沙利度胺组NF-κB表达显著下降（P<0.05）,COX-2表达在TP低剂量组及联合用药各组均显著下降（P<0.05）,Survivin表达在沙利度胺组和TP高剂量联合沙利度胺组明显减低（P<0.05）,在TP高剂量组下降更为显著（P<0.01）；Akt-2表达在实验各组无明显改变（P>0.05）；（6）与模型对照组比较,TP各组及联合用药各组能显著下调肿瘤组织MMP-2蛋白表达（P<0.05）,TP高剂量联合沙利度胺组能显著上调TIMP-2蛋白表达（P<0.05）,TP高、低剂量组的MMP-2/TIMP-2比值均明显降低,TP高剂量联合沙利度胺组比值下降更为显著,C-Jun表达在沙利度胺组和TP高剂量联合沙利度胺组显著下降（P<0.05）。4结论研究发现：（1）TP及其主要成分EGCG对NSCLC细胞系具有一定抑制作用；（2）TP对多药耐药细胞敏感,但不未能逆转多药耐药；（3）TP能够不同程度地抑制NF-κB、AP-1、TLR-2、TLR-4等相关信号通路的传导,以NF-κB、AP-1更为明显;（4）TP高剂量联合沙利度胺能够明显抑制移植瘤生长；（5）NF-κB信号传导通路可能为TP抗肿瘤血管生成的关键途径,其机制与抑制NF-κB活化、降低COX-2表达并降低内皮细胞Survivin表达有关；（6）TP抗血管生成机制可能与下调MMP-2表达、上调TIMP-2表达、调整MMP-2/TIMP-2比值失衡相关,其他途径是通过除C-Jun/AP-1以外的其他信号通路。综上所述,茶多酚对能够在一定程度上抑制肺癌生长及肺癌血管生成,其抗肿瘤血管生成是一个多项环节、多个靶点、多条信号通路同时作用的复杂过程,茶多酚抗新生血管生成具有天然药物广谱、安全等作用特点,符合现代医学多重靶向作用理念,值得进一步深入研究。