貉“白鼻子”病发病机制研究

论文摘要

“白鼻子”病为貉的一种新发疾病,貉患“白鼻子”病后,表现为生长停滞,繁殖率降低,所产皮张质量低下。现“白鼻子”病已经成为了威胁貉养殖业的疾病之一。虽然大多数学者认为”白鼻子”病为营养代谢性疾病,但目前人们还没有确定其真正的发病原因,而制定防治“白鼻子”病有效措施的前提是确切掌握“白鼻子”病的发病机制。在大量的调研和查阅文献的基础上,我们认为“白鼻子”病的发病原因可能同毛皮动物的棉毛雪症(Cottonfur)和火鸡下脚料综合症(Turkey Waste syndrome)相似,是由于某种微营养成分缺乏导致的营养代谢性疾病。本研究用全自动血球分析仪(犬的模式)对“白鼻子”病患貉进行了血液学常规指标测定,用全自动生化分析仪对“白鼻子”病患貉进行了血液常规生化指标测定,用火焰原子吸收分光光度计和荧光分光光度计对“白鼻子”病患貉的血清、被毛、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉等器官组织的铁、铜、锌、硒等微量元素进行了测定。以健康貉为对照组,用SPSS15.0软件对测得的“白鼻子”病患貉的各种数据进行了统计分析。与健康貉相比,“白鼻子”病患貉淋巴细胞计数(p=0.004)、淋巴细胞百分比(p=0.048)、中性粒细胞百分比(p=0.031)、中间细胞数计数(p=0.004)、中间细胞百分比(p=0.004)减少且差异显著(p<0.05),白细胞计数(p=0.130)和中性粒细胞计数(p=0.473)差异不显著(p>0.05)；“白鼻子”病患貉红细胞计数(p=0.000)、红细胞压积(p=0.000)、平均红细胞体积(p=0.001)、血红蛋白(p=0.000)、平均红细胞血红蛋白含量(p=0.001)降低(或减少)且差异极显著(P<0.01),平均红细胞血红蛋白浓度(p=0.915)和红细胞体积分布宽度(p=0.831)差异不显著(P>0.05)；“白鼻子”病患貉血小板计数(p=0.915)、血小板压积(p=0.852)、血小板体积(p=0.202)、血小板体积分布宽度(p=0.749)差异均不显著(P>0.05)。“白鼻子”病患貉的MCH剧减,MCV减少,MCHV略减(与健康貉相比较),据此可以断定“白鼻子”病貉患有低色素小细胞性贫血。与健康貉相比,“白鼻子”病患貉主要和肝脏功能相关生化指标门冬氨酸氨基转移酶(p=0.024)、谷氨酰转移酶(p=0.036)及总胆红素(p=0.019)升高,白蛋白(p=0.040)及白球比(p=0.031)下降,且差异在0.05水平下显著；“白鼻子”病患貉主要和肌肉功能相关生化指标α—羟丁酸脱氢酶(p=0.017)、肌酸激酶(p=0.019)升高,且差异在0.05水平下显著；“白鼻子”病患貉主胆固醇和甘油三脂水平升高,血糖水平下降,但差异不显著。以上指标的异常提示“白鼻子”病患貉存在明显的肝脏疾患,伴发肌肉损伤(肌肉萎缩)。与健康貉相比,“白鼻子”病患貉血清(p=0.0495)、肝脏(p=0.042)、肺脏(p<0.001)、肌肉铁(p<0.001)含量下降,且两组间存在显著差异；“白鼻子”患貉血清(p=0.002)、肺脏(p<0.03)铜含量下降,且两组间差异显著或极显著,脾脏(p<0.001)、肌肉(p=0.002)铜含量升高,且两组间差异显著或极显著；“白鼻子”患貉血清(p<0.001)、脾脏(p<0.001)、肺脏(p<0.001)、肌肉(p<0.001)锌含量下降,且两组间差异极显著,被毛(p<0.001)和心脏(p<0.002)锌含量升高,且两组间差异显著或极显著；“白鼻子”患貉血清(p<0.001)、肺脏(p<0.011)、肾脏(p<0.001)、肌肉(p<.001)硒含量下降,且两组间差异极显著。通过对以上数据的分析,我们发现“白鼻子”病患貉存在铁缺乏的症状,同时患病貉的铁、铜、锌、硒代谢发生紊乱。通过对以上结果的分析,我们认为“白鼻子”病貉患有的低色素小细胞性贫血极有可能是缺铁性贫血。我们先对“白鼻子”病貉(健康貉为组间对照组)进行了肠外(肌肉注射)和肠内(口服)补充右旋糖酐铁的实验,然后测定补铁后“白鼻子”病貉(健康貉为组间对照组)血清、肝脏、十二指肠铁含量的变化,肝脏、十二指肠铁代谢基因Ferroportin 1(Fp1)和Ceruloplasimin(Cp)在铁刺激下的转录表达量的变化。口服补铁后,与未补铁貉相比,“白鼻子”病貉血清、十二指肠、肝脏铁含量没有变化,但健康貉血清、十二指肠、肝脏铁含量均升高。肌肉注射补铁后,“白鼻子”病貉和健康貉血清、十二指肠、肝脏铁含量均显著升高。实验结果说明“白鼻子”病患貉的铁缺乏是由于其肠道对铁的吸收障碍所致。与未补充右旋糖酐铁的实验相比,肌肉补充右旋糖酐铁后,“白鼻子”病患貉红细胞计数、平均红细胞体积、血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白含量等指标升高,差异显著(p<0.05),达到了健康水平；而口服补充右旋糖酐铁后,“白鼻子”病患貉红细胞计数、平均红细胞体积、血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白含量等指标没有明显变化,差异不显著(p<0.05)。以上实验结果证实“白鼻子”病患貉的低色素小细胞性贫血为缺铁性贫血。进一步验证了“白鼻子”病患貉的铁缺乏是由于其肠道对铁的吸收障碍所致的结论。与未补铁的实验貉相比,在肌肉注射过量的右旋糖酐铁后,“白鼻子”病患貉肝脏Cp基因转录表达水平下降,而健康对照貉肝脏Cp基因转录表达量升高且差异显著；在口服过量的右旋糖酐铁后,“白鼻子”病患貉肝脏铁含量没有变化,而健康貉肝脏铁含量升高,“白鼻子”病患貉肝脏Cp基因转录表达量没有明显变化,而健康貉肝脏Cp基因转录表达量升高且差异显著。在肌肉注射过量的右旋糖酐铁后,“白鼻子”病患貉十二指肠Cp基因转录表达水平升高,而健康对照貉肝脏Cp基因转录表达量下降；在口服过量的右旋糖酐铁后,“白鼻子”病患貉十二指肠Cp基因转录表达量没有明显变化,而健康貉十二指肠Cp基因转录表达量下降。以上结果提示“白鼻子”病患貉Cp基因功能的异常和“白鼻子”病貉肠道对铁的吸收障碍有关。本研究得出如下结论：1.“白鼻子”病貉患有低色素小细胞性贫血；2.“白鼻子”病貉患有铁缺乏症；3.“白鼻子”病貉患有的低色素小细胞性贫血为缺铁性贫血；4.“白鼻子”病貉患有的铁缺乏症是由于肠道对铁的吸收障碍所致；5.“白鼻子”病貉铁代谢基因Cp功能的异常与患貉肠道对铁的吸收障碍有关；6.“白鼻子”病貉肝脏、肌肉受到损伤。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 课题背景
• 1.2 貉"白鼻子"病的研究进展
• 1.2.1 貉"白鼻子"病的临床症状
• 1.2.2 目前国内对该病发病原因的探讨
• 1.2.3 与"白鼻子"病相类似的疾病
• 1.3 动物铁、铜、锌、硒的代谢及缺乏症
• 1.3.1 动物铁代谢及其缺乏症
• 1.3.2 动物铜代谢及其缺乏症
• 1.3.3 动物锌代谢及其缺乏症
• 1.3.4 动物硒代谢及其缺乏症
• 1.4 液学常规指标和血液常规生化指标在诊断动物疾病中的应用
• 1.5 本研究的主要内容
• 2 "白鼻子"病貉血液学常规指标及血液常规生化指标的测定分析
• 2.1 实验仪器与试剂
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 实验材料及试剂
• 2.1.4 液学常规指标的测定
• 2.1.5 液常规生化常规指标的测定
• 2.2 结果
• 2.2.1 液学常规指标的测定结果
• 2.2.2 液常规生化指标的测定结果
• 2.3 讨论
• 2.3.1 液血常规指标
• 2.3.2 液常规生化指标
• 2.4 结论
• 3 "白鼻子"病患貉血清、被毛,主要内脏铁、铜、锌、硒含量的分析
• 3.1 实验仪器与试剂
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 实验仪器
• 3.1.3 实验材料及试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 实验样品的制备及前处理
• 3.2.2 样品的消化
• 3.2.3 各微量元素的测定方法和测定参数
• 3.3 结果
• 3.3.1 测定铜、锌、铁、硒用标准溶液及回归方程和相关系数
• 3.3.2 测定貉血清、被毛铜、锌、铁、硒含量方法的精确度、准确度及检出限
• 3.3.3 健康貉和"白鼻子"病患貉血清、被毛及各组织中铁的含量
• 3.3.4 健康貉和"白鼻子"病患貉血清、被毛及各组织中铜的含量
• 3.3.5 健康貉和"白鼻子"病患貉血清、被毛及各组织中锌的含量
• 3.3.6 健康貉和"白鼻子"病患貉血清、被毛及各组织中硒的含量
• 3.3.7 在同一组织内各微量元素的相关性分析
• 3.3.8 不同组织间各微量元素的相关性分析
• 3.4 讨论
• 3.5 结论
• 4 补充右旋糖酐铁后"白鼻子"病貉血清、肝脏铁含量的变化
• 4.1 实验仪器与试剂
• 4.1.1 实验动物
• 4.1.2 实验仪器
• 4.1.3 实验材料及试剂
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 实验动物进行补铁的方法
• 4.2.2 实验动物血清、肝脏铁、铜、锌的测定方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 补铁后实验貉血清、肝脏、十二指肠铁含量的变化
• 4.3.2 补铁后"白鼻子"病貉血色指标的变化
• 4.4 讨论与结论
• 5 补充右旋糖酐铁后患貉十二指肠,肝脏Fp1,Cp基因转录表达量的变化
• 5.1 实验仪器与试剂
• 5.1.1 实验动物
• 5.1.2 实验仪器
• 5.1.3 实验材料及试剂
• 5.1.4 试剂的配制
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 实验样品的采集
• 5.2.2 引物的设计
• 5.2.3 目的基因的克隆和鉴定
• 5.2.4 Fp1,Cp基因转录表达量的定量检测
• 5.3 结果
• 5.3.1 补充右旋糖酐铁后肝脏Cp基因转录表达量的变化
• 5.3.2 补充右旋糖酐铁后十二指肠Cp基因转录表达量的变化
• 5.3.3 补充右旋糖酐铁后肝脏和十二指肠Fp1基因转录表达量的变化
• 5.4 讨论
• 5.5 结论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢