仙鱼汤减轻肺癌化疗副反应的实验研究与临床研究

论文摘要

目的:研究仙鱼汤提取工艺;探讨仙鱼汤联合化疗对小鼠Lewis肺癌的生长抑制、免疫调节、血液系统、细胞周期的影响,并对其抗癌作用机制进行探讨;观察仙鱼汤减轻肺癌化疗副反应的临床研究。方法:1.提取工艺研究方法:以总黄酮、总多糖的提取总量为考察指标,采用正交试验法考察以水为溶媒的提取条件。2.实验研究:复苏Lewis肺癌细胞株,皮下注射细胞悬液复制Lewis肺癌荷瘤小鼠。按照体重随机分为6组,荷瘤模型组、仙鱼汤低浓度组(1.092 g·ml-1)、仙鱼汤中浓度组(2.184 g·ml-1)、仙鱼汤高浓度组(4.368g·ml-1)、顺铂组（3mg/kg）、顺铂加仙鱼汤组(4.368 g·ml-1),每组10只。接种15天后,观察小鼠生活状态;电子天平称重测定瘤肿抑制率和小鼠脾脏指数;血球计数仪检测血常规;HE染色观察肿瘤生长、肿瘤坏死、间质反应和肿瘤及肿瘤周围炎性细胞浸润情况。体外培养肺癌Lewis细胞株,随机分为六组:肺癌细胞组、仙鱼汤低浓度组(1.092 g·ml-1)、仙鱼汤中浓度组(2.184 g·ml-1)、仙鱼汤高浓度组(4.368 g·ml-1)、顺铂组(2u g·ml-1)、顺铂加仙鱼汤(4.368 g·ml-1)组。各组不同处理因素作用48小时后,倒置光学显微镜观察小鼠Lewis肺癌细胞生长密度及形态变化;收集细胞,四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期;原位末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡。3.临床研究:将90例合格的中晚期非小细胞肺癌患者随机分为仙鱼汤组、化疗组和仙鱼汤加化疗组,仙鱼汤组患者予口服仙鱼汤治疗;化疗组患者接受化疗,仙鱼汤加化疗组接受化疗及口服仙鱼汤治疗。各组均治疗一个疗程,比较各组的瘤体大小、肺癌主要临床症状、生存质量、体重、免疫功能及毒副反应等。结果:1.提取工艺:溶媒用量、提取次数对各指标都有显著影响,优选出最佳的提取工艺即溶媒用量为15倍,每次提取时间为30min,提取3次,浸泡10min。2.体外实验:①各治疗组肿瘤的生长明显受到抑制,肿瘤重量均低于荷瘤模型组,差异均有显著性意义（P＜0.01）。中药各组随着药物剂量的增加,瘤重逐渐减轻。顺铂+仙鱼汤组对肿瘤生长抑制最明显,抑瘤率为68.98%。与单纯顺铂组相比抑瘤率为（59.63%）,顺铂+仙鱼汤组亦有显著差异（P＜0.05）。②与荷瘤模型组相比,仙鱼汤中浓度组与高浓度组可降低荷瘤小鼠的脾指数,统计有显著性差异（P＜0.01）,而仙鱼汤低浓度组无作用。与荷瘤模型组相比,顺铂组的脾脏指数明显偏低（P＜0.01）,然而顺铂+仙鱼汤组小鼠的脾脏指数较顺铂组小鼠明显提高,且差异有显著性意义（P＜0.01）。③各仙鱼汤组与荷瘤模型组小鼠的WBC,RBC,Hb比较无显著性差异。顺铂组小鼠外周血WBC、RBC、Hb较荷瘤模型组明显降低,统计有显著性差异（P＜001）。相比顺铂组,仙鱼汤加顺铂组的WBC明显升高,有统计学意义（P＜0.05）,而对RBC、Hb影响不大。④HE染色观察各治疗组肿瘤组织的坏死、凋亡面积增大。⑤各治疗组可显著降低肺癌细胞MTT-OD值,使S期细胞比率下降,G1期细胞比率增加,细胞凋亡增多。其中顺铂+仙鱼汤组作用最明显,差异均有显著性意义（P＜0.01,P＜0.05）。与顺铂组相比,顺铂+仙鱼汤组亦有显著差异（P＜0.01）。3.临床研究:对瘤体改变观察显示,仙鱼汤加化疗组有效率（46.67%）高于化疗组（26.67%）,但无显著性差异（P＞0.05）。仙鱼汤组（3.33%）有效率低于化疗组（P＜0.01）;瘤体稳定率比较,仙鱼汤加化疗组稳定率最高（83.33%）,但与化疗组（60.00%）无显著性差异（P＞0.05）,仙鱼汤组稳定率（70.00%）高于化疗组,但无显著性差异（P＞0.05）。与化疗组相比,仙鱼汤组在咳嗽、发热、气短、乏力等方面有较好的有效性（P＜0.05）;而在血痰、胸痛、纳差等方面,无显著性差异（P＞0.05）。仙鱼汤加化疗组与仙鱼汤组比较,二组均可明显改善各症状,但二者相比较均无显著性差异。仙鱼汤组和仙鱼汤加化疗组治疗后患者KPS评分提高,与化疗组比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。三组治疗后均能不同程度增加患者的体重,通过对比,联合组和仙鱼汤比化疗组能明显增加患者的体重（P＜0.05或P＜0.01）。仙鱼汤组与联合组治疗后,自然杀伤细胞和淋巴细胞转换率均较治疗前提高,以仙鱼汤组提高较为明显（P＜0.01）,与化疗组比较有显著性差异（P＜0.01）。治疗后各组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+总体方差有显著性比较,经LSD比较,化疗组与仙鱼汤组及仙鱼汤加化疗组均存在显著差异,但仙鱼汤组与仙鱼汤加化疗组在治疗后不存在差异（P＞0.05）。提示仙鱼汤能在一定程度上具有提高患者机体免疫功能的作用。仙鱼汤组无明显不良反应,联合组不良反应率较化疗组明显减少,特别是在血液系统、谷丙转氨酶、恶心呕吐、血尿素氮、肌酐、心率、过敏、头发、周围神经、皮肤等方面具有显著性差异（P＜0.05）。结论:1.仙鱼汤能促进顺铂抑制小鼠Lewis肺癌的生长,其机制可能与阻滞细胞周期进程、促进细胞凋亡有关。2.仙鱼汤能提高Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能,对小鼠血液系统无明显毒副作用。与顺铂联合运用可降低顺铂的毒副作用。3.仙鱼汤毒副作用较少,具有稳定瘤体,改善中晚期非小细胞肺癌患者的临床主要症状,提高患者生活质量,增加体重,提高免疫力等作用;与化疗结合,能提高化疗药物的治疗效果,减轻其毒副反应。

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引言

第一部分文献研究

1 现代医学对肺癌及化疗减毒增效的认识

1.1 现代医学对肺癌的认识

1.2 有关化疗毒副反应机理的认识

1.3 对减毒增效的认识

2 中医对肺癌的认识及对化疗减毒增效的研究

2.1 病名溯源

2.2 病因病机

2.3 中医对化疗毒副反应的机理认识

3 中医药对化疗减毒增效作用的研究

3.1 辨证论治，应用中药汤剂

3.2 中成药对肺癌化疗的增效作用

4 仙鱼汤的组方用药

4.1 方药分析

4.2 现代中药药理实验研究

第二部分仙鱼汤提取条件的优化

1 仪器与试药

1.1 实验材料

1.2 主要仪器与设备

1.3 主要试剂

2 方法和结果

2.1 测定方法的建立

2.1.1 总黄酮含量测定

2.1.1.1 芦丁对照品溶液及显色试剂的配制

2.1.1.2 测定波长的选择

2.1.1.3 标准曲线的绘制

2.1.1.4 仙鱼汤供试液的制备

2.1.1.5 精密度试验

2.1.1.6 仙鱼汤中各样品含量中总黄酮含量测定

2.1.1.7 稳定性试验

2.1.1.8 加样回收试验

2.1.1.9 实验结果及分析

2.1.2 仙鱼汤中总多糖含量测定

2.1.2.1 葡萄糖对照品溶液及显色试剂的配制

2.1.2.2 测定波长的选择

2.1.2.3 标准曲线的绘制

2.1.2.4 仙鱼汤供试液的制备

2.1.2.5 精密度试验

2.1.2.6 样品含量测定

2.1.2.7 稳定性试验

2.1.2.8 加样回收试验

2.1.2.9 实验结果及分析

3 验证试验

4 讨论

第三部分仙鱼汤联合化疗对小鼠Lewis肺癌影响的实验研究

1. 材料

1.1 实验动物

1.2 细胞株

1.3 药物及药物制备

1.4 主要试剂

1.5 主要仪器和器材

2 方法

2.1 主要试剂的配制

2.2 Lewis肺癌荷瘤小鼠模型建立

2.3 实验分组及给药

3 观察指标及检测方法

3.1 动物实验部分

3.1.1 小鼠生活状态观察

3.1.2 瘤肿抑制率

3.1.3 小鼠脾脏指数的测定

3.1.4 血常规

3.1.5 HE染色

3.2 体外实验部分

3.2.1 倒置光学显微镜观察小鼠Lewis肺癌细胞生长密度及形态变化

3.2.2 细胞增殖抑制实验

3.2.3 流式细胞仪分析细胞周期

3.2.4 原位末端标记法（TUNEL法）检测细胞凋亡

3.3 统计学分析

4 结果

4.1 一般状态观察

4.2 仙鱼汤对Lewis肺癌小鼠的瘤肿抑制率

4.3 仙鱼汤对Lewis肺癌小鼠的脾脏影响

4.4 Lewis肺癌小鼠的血常规改变

4.5 HE染色观察小鼠Lewis肺癌细胞

4.6 倒置光学显微镜观察小鼠Lewis肺癌细胞生长密度及形态变化

4.7 仙鱼汤对Lewis肺癌细胞增殖增殖活性影响

4.8 FCM分析肺癌细胞周期改变

4.9 TUNEL法检测细胞凋亡

5 讨论

第四部分仙鱼汤配合化疗治疗中晚期非小细胞肺癌临床研究

1. 研究对象和方法

1.1 研究对象

1.2 技术路线

1.3 方法

1.3.1 西医诊断标准

1.3.2 肺癌中医辨证分型标准

1.4 纳入标准

1.5 排除标准

1.6 治疗方案

1.6.1 分组方法

1.6.2 治疗方法

1.6.3 观察项目及疗效判定标准

1.7 统计分析方法

2 结果

结语

参考文献

附录

致谢

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