CACC通道通透及门控特性的研究

论文摘要

生命的神奇之处在于可以不断的与外界进行能量、信息及物质的交换，离子通道处于生物体信息及物质交换的关键环节，具有重要作用。作为离子通道的重要成员，钙激活氯通道（CACC）是一类广泛分布在多种组织内的阴离子通道，参与了诸如神经元兴奋性的调节、平滑肌收缩的维持、卵母细胞受精和心脏动作电位的复极化等过程，具有十分重要的生理学意义。本文以TMEM16A/CACC稳转细胞系为研究对象，采用膜片钳内向外记录模式，研究了CACCs通道的电生理特性，得到了以下结论：一、采用膜片钳内向外记录模式，研究了稳定表达于HEK细胞系的TMEM16A通道具有钙离子依赖性，得到了不同胞内钙离子浓度下，TMEM16A通道的I-V曲线，其I-V曲线呈外向整流特性。二、采用膜片钳内向外记录模式，研究了胞内、外钙离子调节TMEM16A通道的异同，进一步证实了TMEM16A通道的钙离子结合位点应该位于胞内的结论。三、采用膜片钳内向外记录模式，研究了NFA对TMEM16A通道的抑制作用及长时间内向外记录引起电流Rundown的实验现象。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 离子通道简介
• §1-1 绪论
• §1-2 离子通道简介
• 1-2-1 离子通道的研究简史
• 1-2-2 离子通道的基本特性及分类
• 1-2-3 离子通道的研究方法
• §1-3 钙激活氯离子通道简介
• 1-3-1 CACC 通道的分子基础
• 1-3-2 CACC 通道的特性
• 1-3-2-1 CACC 通道的离子选择性
• 1-3-2-2 Cl-离子对CACC 的影响
• 2+离子对CACC 的影响'>1-3-2-3 Ca²⁺离子对CACC 的影响
• 1-3-2-4 CACC 通道的药理学特性
• §1-4 KCNQ 钾离子通道简介
• 1-4-1 KCNQ 钾离子通道结构特性
• 1-4-2 M 通道的电生理特性及结构基础
• 1-4-3 M 通道的药理学特性
• 第二章 材料与方法
• §2-1 材料
• 2-1-1 试剂
• 2-1-2 仪器
• 2-1-3 实验用细胞及质粒
• §2-2 分子生物学实验
• 2-2-1 大肠杆菌感受态的制备与转化
• 2-2-1-1 培养液配制方法
• 2-2-1-2 感受态的制备
• 2-2-1-3 转化
• 2-2-2 质粒DNA 的制备
• §2-3 HEK293 细胞的培养
• 2-3-1 试剂的配制
• 2-3-2 HEK293 细胞的培养及传代
• 2-3-3 细胞的冻存与复苏
• 2-3-4 瞬时转染
• 2-3-5 抗G418 克隆筛选
• §2-4 电生理方法及数据处理
• 第三章 离子通道电生理特性的研究结果
• §3-1 TEA 对M 通道抑制作用的研究
• §3-2 钙离子调控CACC 通道的实验研究
• 3-2-1 钙离子浓度对CACC 通道调控机制的研究
• 3-2-2 CACC通道钙离子结合位点的研究
• §3-3 NFA 对CACC 通道抑制特性的研究
• §3-4 关于Rundown 现象的研究
• 第四章 结论与展望
• §4-1 结论
• §4-2 展望
• 2+对TMEM16A 的调控机制'>4-2-1 Ca²⁺对TMEM16A 的调控机制
• 4-2-2 TMEM16A内向外记录模式时Rundown问题
• 4-2-3 CACC通道的药理学特性的进一步研究
• 参考文献
• 致谢