本文主要研究内容
作者王晶晶,张新笑,卞欢,耿志明,李鹏鹏,王道营,徐为民（2019）在《麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶高效可溶性表达及其部分酶学性质》一文中研究指出：【目的】克隆麻鸭磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPx4)并在大肠杆菌中表达,分析其酶学特性,为研究GPx4功能及其在羟基脂肪酸形成过程中的调节机制打下基础。【方法】采用RT-PCR克隆麻鸭GPx4(DGPx4)的编码基因,利用定点突变的方法构建半胱氨酸突变体DGPx4表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→Cys),并在大肠杆菌中通过添加His标签进行可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化得到融合蛋白DGPx4;采用总谷胱甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒检测DGPx4活力以研究其酶学性质。【结果】克隆获得的DGPx4基因编码序列全长516 bp,编码172个氨基酸,编码蛋白分子量约20 k D,理论等电点(p I)为8.9。构建的突变体基因原核表达载体pMBP-DGPx4(48Sec→Cys)可在大肠杆菌中成功诱导表达获得融合蛋白DGPx4,经Ni-NTA亲和层析和离子交换层析即获得高纯度的DGPx4。以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)为底物时,DGPx4的最适反应温度为32℃,最适pH为8.0,对NaCl浓度较敏感;Cu2+和Ni2+对DGPx4活力有较高的促进作用,Mg2+和Mn2+对DGPx4活力有一定的抑制作用,Ca2+和Zn2+对DGPx4活力则无明显的促进或抑制作用。【结论】从鸭肝细胞中克隆获得的DGPx4基因序列经定点突变后可在原核细胞中高效表达,且纯化后的高纯度融合蛋白DGPx4具有GPx4活力,能在抗脂质氧化过程中发挥作用。
Abstract
【mu de 】ke long ma ya lin zhi qing gu guang gan tai guo yang hua wu mei ji yin (GPx4)bing zai da chang gan jun zhong biao da ,fen xi ji mei xue te xing ,wei yan jiu GPx4gong neng ji ji zai qiang ji zhi fang suan xing cheng guo cheng zhong de diao jie ji zhi da xia ji chu 。【fang fa 】cai yong RT-PCRke long ma ya GPx4(DGPx4)de bian ma ji yin ,li yong ding dian tu bian de fang fa gou jian ban guang an suan tu bian ti DGPx4biao da zai ti pMBP-DGPx4(48Sec→Cys),bing zai da chang gan jun zhong tong guo tian jia Hisbiao qian jin hang ke rong xing biao da ,jing Ni-NTAqin he ceng xi he li zi jiao huan ceng xi chun hua de dao rong ge dan bai DGPx4;cai yong zong gu guang gan tai guo yang hua wu mei huo xing jian ce shi ji he jian ce DGPx4huo li yi yan jiu ji mei xue xing zhi 。【jie guo 】ke long huo de de DGPx4ji yin bian ma xu lie quan chang 516 bp,bian ma 172ge an ji suan ,bian ma dan bai fen zi liang yao 20 k D,li lun deng dian dian (p I)wei 8.9。gou jian de tu bian ti ji yin yuan he biao da zai ti pMBP-DGPx4(48Sec→Cys)ke zai da chang gan jun zhong cheng gong you dao biao da huo de rong ge dan bai DGPx4,jing Ni-NTAqin he ceng xi he li zi jiao huan ceng xi ji huo de gao chun du de DGPx4。yi yan xian an xian piao ling er he gan suan lin suan (NADPH)wei de wu shi ,DGPx4de zui kuo fan ying wen du wei 32℃,zui kuo pHwei 8.0,dui NaClnong du jiao min gan ;Cu2+he Ni2+dui DGPx4huo li you jiao gao de cu jin zuo yong ,Mg2+he Mn2+dui DGPx4huo li you yi ding de yi zhi zuo yong ,Ca2+he Zn2+dui DGPx4huo li ze mo ming xian de cu jin huo yi zhi zuo yong 。【jie lun 】cong ya gan xi bao zhong ke long huo de de DGPx4ji yin xu lie jing ding dian tu bian hou ke zai yuan he xi bao zhong gao xiao biao da ,ju chun hua hou de gao chun du rong ge dan bai DGPx4ju you GPx4huo li ,neng zai kang zhi zhi yang hua guo cheng zhong fa hui zuo yong 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自南方农业学报的王晶晶,张新笑,卞欢,耿志明,李鹏鹏,王道营,徐为民，发表于刊物南方农业学报2019年05期论文，是一篇关于麻鸭论文,磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶论文,原核表达论文,纯化论文,酶学性质论文,南方农业学报2019年05期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自南方农业学报2019年05期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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