心肌靶向脂质体的研究

论文题目: 心肌靶向脂质体的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 药剂学

作者: 陈妍

导师: 邓英杰

关键词: 脂质体,心肌细胞,心肌靶向性

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 大部分心血管治疗药物（特别是蛋白多肽类药物）因缺乏组织特异性或在体内易降解而难以达到心血管病变部位发挥治疗作用，本课题设计制备了心肌靶向脂质体，主要是在脂质体的表面连接具有心肌细胞靶向性的导向化合物，以促进脂质体所包封的药物浓集于心肌（特别是缺血心肌），实现心肌靶向给药的目的。 本论文主要包括以下内容： 1 导向化合物PAC的合成及心肌细胞导向活性考察。以对羟基苯丙酸为起始原料合成了与选择性β1-受体阻滞剂艾司洛尔（Esmolol）结构类似的亲脂性化合物3-(4-[2-羟基-（1-甲基乙胺基）丙氧基]苯基}丙酸十六醇酯（PAC）。体外细胞实验研究证明PAC具有心肌细胞导向活性。 2 PAC修饰心肌靶向脂质体（PAC-L）的制备。10％PAC的加入对脂质体的粒径无影响，但能够显著提高脂质体的ζ电位（从-12.8+0.8mv增至15.6±1.1mv），PAC-L表面荷正电。PAC-L在血清中的稳定性及体内外安全性较好。 3 PAC-L体外心肌细胞靶向性评价及机理研究。PAC-L在不同脂质浓度和不同培养时间的心肌细胞摄取均显著高于普通脂质体Plain-L（P＜0.001）；Esmolol（0.1mmol/L）的加入能够显著降低心肌细胞对PAC-L的摄取（P＜0.001），其原因为Esmolol竞争性占据了PAC-L与β1-AR的结合位点，证明PAC-L是通过与心肌细胞表面的β1-AR结合从而实现心肌靶向性。培养时间为2小时，心肌细胞对PAC-L的摄取较非心肌细胞高2.4倍，证明PAC-L能够识别心肌细胞，具有心肌细胞特异靶向性；常氧条件下心肌细胞对PAC-L的摄取较Plain-L高3.9倍，而PAC-L对处于缺氧状态的心肌细胞的靶向性更加突出，较Plain-L高6.2倍；PAC的加入改变了心肌细胞对脂质体的摄取方式，通过配体-受体相互作用诱导心肌细胞的内吞摄取显著增加（从11％增至56％）；经PEG修饰后PAC-L与心肌细胞的亲和性仍显著高于Plain-L（2.5倍）；脂质体的加入能够明显降低缺氧对心肌细胞的损伤，PAC-L对缺氧心肌细胞的保护作用明显优于Plain-L。

论文目录:

缩略语表

中文摘要

ABSTRACT

前言

第一章 脂质体体外心肌细胞靶向性的研究方法

第一节 乳鼠心肌细胞的原代分离培养

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 乳鼠心肌细胞的原代分离培养

2.1.1 基本原理

2.1.2 试液的配制

2.1.3 分离培养方法

2.2 细胞存活率评定

2.3 纯度评定

3 实验结果

4 讨论

第二节 细胞蛋白总含量的测定

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 原理

2.2 试剂配制

2.3 标准曲线的绘制

2.4 细胞裂解液中细胞蛋白含量的测定

3 实验结果

4 讨论

第三节 NBD膜荧光标记脂质体的制备及荧光强度测定

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 NBD膜荧光标记脂质体的制备

2.2 NBD荧光的测定

2.2.1 NBD-PC标准溶液的配制

2.2.2 标准曲线的绘制

2.2.3 精密度测定

2.3 脂质体荧光标记率的测定

3 实验结果

3.1 NBD膜荧光标记脂质体的制备及荧光标记率

3.2 NBD荧光标准曲线

3.3 NBD荧光测定精密度和回收率

4 讨论

第四节 心肌细胞对脂质体摄取的测定

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 心肌细胞与脂质体共同培养条件的选择

2.2 心肌细胞摄取脂质体的测定方法

2.3 样品测定

3 实验结果

4 讨论

第五节 荷电及 PEG修饰对脂质体心肌细胞靶向性的影响

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 NBD膜荧光标记脂质体的制备

2.2 荷电及 PEG修饰对脂质体心肌细胞靶向性影响的测定

3 实验结果

3.1 脂质体的粒径及Zeta电位

3.2 荷电及 PEG修饰对脂质体心肌细胞靶向性的影响

4 讨论

本章小结

第二章 脂质体体内心肌靶向性的研究方法

第一节 Calcein脂质体的制备

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 Calcein脂质体的制备

2.2 脂质体中 Calcein的含量测定

2.2.1 Calcein测定标准曲线的绘制

2.2.2 精密度测定

2.2.3 回收率测定

2.2.4 脂质体中Calcein的含量的测定

3 实验结果

3.1 Calcein测定标准曲线

3.2 精密度和回收率

4 讨论

第二节 组织中Calcein含量的测定方法

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 血浆中Calcein含量测定标准曲线的绘制

2.2 肝、脾组织中Calcein含量测定标准曲线的绘制

2.3 心、肺、肾组织中Calcein含量测定标准曲线的绘制

3 结果与讨论

3.1 血浆及组织中Calcein含量测定标准曲线

3.2 精密度与回收率

第三节 Calcein脂质体在小鼠体内的组织分布

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 Calcein脂质体的制备

2.2 血浆及组织样品制备

3 实验结果

4 讨论

第四节 粒径对脂质体心肌靶向性的影响

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 Calcein脂质体的制备

2.2 血浆及组织样品制备

3 实验结果

4 讨论

第五节 PEG修饰对脂质体心肌靶向性的影响

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 Calcein脂质体的制备

2.2 血浆及组织样品制备

2.3 统计学处理

3 实验结果

4 讨论

本章小结

第三章 心肌靶向脂质体(PAC-L)的制备

第一节 导向化合物PAC的合成

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 靶向化合物PAC的合成

2.2 靶向化合物 PAC的结构鉴定

3 实验结果

3.1 靶向化合物PAC的合成

3.2 靶向化合物PAC的结构鉴定

4 讨论

第二节 PAC修饰脂质体(PAC-L)的制备

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 PAC修饰脂质体(PAC-L)的制备

2.2 PAC定量方法

2.2.1 标准曲线的绘制

2.2.2 精密度测定

2.2.3 回收率测定

2.3 PAC-L中PAC掺入率的测定

3 实验结果

3.1 PAC测定标准曲线

3.2 精密度与回收率

3.3 PAC掺入率

第三节 导向化合物的活性考察

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 NBD荧光标记的PAC-L的制备

2.2 PAC对脂质体与心肌细胞亲和性影响的定性观察

2.3 PAC加入量对PAC-L心肌细胞靶向性的影响

3 实验结果

3.1 PAC对脂质体与心肌细胞亲和性影响的定性观察

3.2 PAC加入量对PAC-L心肌细胞靶向性的影响

4 讨论

第四节 PAC对脂质体在血清中渗漏的影响

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 包封 Calcein的PAC-L的制备

2.2 PAC的加入对脂质体在血清中渗漏的影响

3 实验结果

4 讨论

第五节 PAC-L的安全性考察

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 PAC-L的制备

2.2 体外细胞安全性考察

2.3 体内安全性考察

3 结果与讨论

3.1 体外安全性

3.2 体内安全性

本章小结

第四章 PAC-L的体外心肌细胞靶向性研究

第一节 脂质浓度及培养时间对心肌细胞摄取PAC-L的影响

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 PAC-L的制备及特征

2.2 脂质浓度对心肌细胞摄取的影响

2.3 培养时间对心肌细胞摄取的影响

3 实验结果

3.1 PAC-L的特征

3.2 脂质浓度对心肌细胞摄取的影响

3.3 培养时间对心肌细胞摄取的影响

4 讨论

第二节 PAC-L的心肌细胞靶向性及机理研究

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 NBD荧光标记的PAC-L的制备

2.2 Esmolol对心肌细胞摄取PAC-L的影响

2.3 心肌细胞与非心肌细胞对PAC-L的摄取

2.4 缺氧对心肌细胞摄取PAC-L的影响

2.5 PAC-L对心肌细胞摄取方式的影响

3 结果与讨论

3.1 Esmolol对心肌细胞摄取PAC-L的影响

3.2 心肌细胞与非心肌细胞对PAC-L的摄取

3.3 缺氧对心肌细胞摄取PAC-L的影响

3.4 PAC-L对心肌细胞摄取方式的影响

第三节 PEG修饰对心肌细胞摄取PAC-L的影响

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 NBD荧光标记的PAC-L的制备

2.2 PEG修饰对心肌细胞摄取的影响

3 实验结果

4 讨论

第四节 PAC-L对缺氧心肌细胞的保护作用

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 PAC-L的制备

2.2 PAC-L对缺氧心肌细胞的保护作用

3 实验结果

4 讨论

本章小结

第五章 PAC-L的体内心肌靶向性研究

第一节 PAC-L在小鼠体内的组织分布及心肌靶向性评价

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 包封 Calcein的PAC-L的制备

2.2 血浆及组织样品制备

2.3 靶向性评价

3 结果与讨论

3.1 Plain-L和PAC-L的粒径及 Zeta电位

3.2 PAC-L在小鼠体内的组织分布

3.3 PAC-L的心肌靶向性评价

第二节 PEG修饰的PAC-L在小鼠体内的组织分布及心肌靶向性评价

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 包封 Calcein的PAC-L_(PEG)的制备

2.2 血浆及组织样品制备

2.3 靶向性评价

2.4 统计学处理

3 结果与讨论

3.1 Plain-L_(PEG)和 PAC-L_(PEG)的粒径及 Zeta电位

3.2 PAC-L_(PEG)在小鼠体内的组织分布

3.3 PAC-L_(PEG)的心肌靶向性评价

本章小结

第六章 bFGF心肌靶向脂质体的制备

第一节 bFGF的活性及含量测定方法

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 bFGF活性测定方法

2.1.1 MTT活性检测法原理

2.1.2 MTT法测定bFGF活性

2.2 bFGF原液活性测定

2.3 bFGF含量测定方法

2.3.1 ELISA测定原理

2.3.2 ELISA测定bFGF含量

2.3.3 标准曲线的绘制

3 结果与讨论

3.1 bFGF原液活性测定

3.2 ELISA测定bFGF含量标准曲线

第二节 bFGF心肌靶向脂质体的制备

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 bFGF脂质体的制备方法

2.2 bFGF脂质体制备方法对蛋白活性的影响

2.3 bFGF脂质体包封率的测定

2.4 影响bFGF脂质体包封率的因素考察

2.4.1 Chol对包封率的影响

2.4.2 SPG对包封率的影响

2.4.3 PAC对包封率的影响

2.4.4 PDS-Chol对包封率的影响

2.4.5 PEG对包封率的影响

2.4.6 蔗糖对包封率及粒径的影响

2.5 bFGF脂质体基本处方的确定

2.6 bFGF脂质体的稳定性考察

2.7 统计学处理

3 结果与讨论

3.1 bFGF脂质体制备方法对蛋白活性的影响

3.2 影响bFGF脂质体包封率的因素考察

3.2.1 Chol对包封率的影响

3.2.2 SPG对包封率的影响

3.2.3 PAC对包封率的影响

3.2.4 PDS-Chol对包封率的影响

3.2.5 PEG对包封率的影响

3.2.6 蔗糖对包封率及粒径的影响

3.3 bFGF脂质体处方

3.4 bFGF脂质体的稳定性

本章小结

第七章 bFGF心肌靶向脂质体的初步药效学考察

第一节 bFGF心肌靶向脂质体在大鼠心、肺的分布考察

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 bFGF脂质体的制备

2.2 组织样品制备

2.3 免疫组化染色

2.4 图像分析

3 实验结果

3.1 bFGF免疫组化染色

3.2 图像分析

4 讨论

第二节 bFGF心肌靶向脂质体对心肌保护作用的初步药效学考察

1 仪器与材料

2 实验方法

2.1 bFGF脂质体的制备

2.2 组织样品制备

2.3 心肌组织病理学检查

2.4 血清乳酸脱氢酶含量测定

2.5 心肌组织胶原含量测定

2.6 心肌组织丙二醛含量测定

2.7 心肌组织 ATP酶含量测定

3 实验结果

3.1 心肌组织病理学变化

3.2 血清乳酸脱氢酶含量

3.3 心肌组织胶原含量

3.4 心肌组织丙二醛含量

3.5 心肌组织 ATP酶含量

4 讨论

本章小结

全文结论

参考文献

致谢

作者简介

发布时间: 2006-11-27

参考文献

• [1].叶酸受体介导的米托蒽醌白蛋白纳米粒靶向卵巢癌细胞给药系统的研究[D]. 张良珂.四川大学2004
• [2].纤维素硫酸钠用于药用植物胶囊及结肠靶向给药胶囊的研究[D]. 王明君.浙江大学2010
• [3].结缔组织生长因子多肽（P1c）修饰的脂质体制备及整合素ανβ3靶向性研究[D]. 严雪娇.东南大学2016
• [4].Fe3O4@ZnMxO4@mSiO2-APTES（ZnMxO4=ZnAl2O4,ZnWO4）纳米材料的合成和微波控释给药的微量热研究[D]. 赵微微.西北大学2016

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