雌二醇、孕酮对雌性绵羊生殖道β-防御素表达影响的研究

论文摘要

内源性抗微生物肽是生物体内先天性免疫的重要组成成分,防御素（defensins）是其中一大家族。β-防御素是防御素家族中的重要成员之一,它主要分布于哺乳动物和鸟类的粘膜上皮组织内,被认为是黏膜表面抗微生物屏障的重要组成成分。关于生殖道β-防御素的研究主要涉及人类、小鼠;国内外学者对家畜,反刍动物生殖道防御素研究较少。本文应用电化学发光免疫法测定血清中雌二醇、孕酮的浓度;应用荧光定量RT-PCR法检测绵羊生殖道β-防御素（sBD-1）的相对表达量,就雌性绵羊生殖道sBD-1的表达与血清中雌二醇、孕酮含量之间的关系进行系统的研究。结果显示:绵羊输卵管、子宫、宫颈、阴道4个器官内sBD-1的相对表达量差异显著,其中宫颈sBD-1的相对表达量明显高于阴道（P＜0.01）,高于子宫和输卵管（P＜0.05）;子宫sBD-1的相对表达量高于阴道（P＜0.05）,但是与输卵管差异不显著（P＞0.05）;输卵管sBD-1的相对表达量高于阴道（P＜0.05）。随发情时间的不同,同一器官内sBD-1的相对表达量呈规律性变化,发情周期各阶段差异显著（P＜0.05）。发情第六、九、十二天sBD-1的相对表达量明显高于发情当天（P＜0.01）,高于发情第三天（P＜0.05）,而发情第六、九、十二天之间sBD-1的相对表达量差异不显著（P＞0.05）;发情第三天sBD-1的相对表达量高于发情当天（P＜0.05）。运用回归方程分析雌二醇及孕酮浓度与sBD-1的相对表达量变化的相关性,结果表明,雌二醇浓度与sBD-1的相对表达量的相关系数R2=0.9146,孕酮浓度与sBD-1的相对表达量的相关系数R2=0.9175,表明发情期雌二醇及孕酮浓度的变化均与sBD-1的相对表达量变化呈正相关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 β-防御素的研究进展
• 1.1.1 β-防御素的发现及其分布
• 1.1.2 β-防御素的结构特征
• 1.1.3 β-防御素基因的表达调节
• 1.1.4 β-防御素的生物学活性、机制及其影响因素
• 1.1.5 β-防御素的生物合成
• 1.1.6 β-防御素的应用
• 1.1.7 β-防御素的研究展望
• 1.2 性激素的研究进展
• 1.2.1 性激素的分类及来源
• 1.2.2 性激素的生理作用
• 1.3 本研究的目的、意义
• 2 实验一 绵羊的同期发情
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要药品与器材
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 同期发情羊的选择
• 2.2.2 放栓
• 2.2.3 同期发情处理
• 2.2.4 羊的发情鉴定
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 雌性绵羊的同期发情结果
• 2.3.2 同期发情羊卵巢图
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 3 实验二 血清中雌二醇及孕酮浓度的测定
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 主要仪器设备及试剂
• 3.1.3 雌二醇及孕酮浓度的测定
• 3.2 结果
• 3.2.1 发情期绵羊血清中雌二醇及孕酮的浓度,
• 3.2.2 雌二醇及孕酮浓度随时间变化曲线
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 实验三 绵羊生殖道sBD-1表达量在发情周期不同阶段的变化规律
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 主要仪器设备及试剂
• 4.1.3 PCR引物设计
• 4.1.4 生殖系统器官总RNA的提取
• 4.1.5 实时荧光定量RT-PCR
• 4.1.6 RT-PCR产物检测及PCR产物序列测定
• 4.1.7 氨基酸序列分析
• 4.1.8 实验数据处理
• 4.2 结果
• 4.2.1 绵羊生殖道各器官RNA及RT-PCR结果
• 4.2.2 sBD-1与β-Actin的扩增效率曲线及扩增曲线
• 4.2.3 RT-PCR产物特异性检测
• 4.2.4 雌性绵羊生殖道各器官RT-PCR结果
• 4.2.5 sBD-1的相对表达量变化与性激素浓度的相关性分析
• 4.3 讨论
• 4.3.1 发情周期不同时期sBD-1的相对表达量变化
• 4.3.2 雌二醇、孕酮浓度与sBD-1的相对表达量之间的相关关系
• 4.4 小结
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介