天麻与钩藤配伍前后效应成分的组织分布与归经探讨

论文摘要

中药归经理论是指药物对机体某些部位具有特殊作用或对其具有相对较明显的作用。天麻是兰科植物天麻（Gastrodia elata Bl.）的干燥块茎,是平肝熄风止痉的传统名贵中药,其用药历史达1000多年。天麻性甘、味平,归肝经。为治疗肝阳上亢、肝风内动的要药。本研究建立了测定原发性高血压（SHR）大鼠组织中天麻的主要效应成分天麻素含量的方法以及通过讨论药对配伍作用对天麻素在大鼠体内分布过程的影响研究,初步地探讨了天麻的归经理论及药对配伍在归经中的意义。1.建立测定原发性高血压（SHR）大鼠组织中天麻的效应成分天麻素含量的方法本研究以SHR大鼠为对象,取大鼠肝脏、肾脏组织,制作成组织匀浆。用试剂沉淀组织中的蛋白质并把醇溶液用氮气吹干,加试剂溶解后直接用高效液相色谱法测定。结果：取出SHR大鼠肝脏、肾脏,加生理盐水配置成组织匀浆液。用8倍量甲醇沉淀组织匀浆中的蛋白质并把甲醇溶液用氮气流吹干,加双蒸水溶解后直接用高效液相色谱法测定其内天麻素的含量。色谱条件：乙腈-1%磷酸（3：97）,流速：1.0 mL·min-1,检测波长：220nm,柱温：30℃。研究结果表明：该方法简便、稳定、易行,可以用于测定SHR大鼠组织中天麻素的含量。2.通过天麻与钩藤配伍前后效应成分的组织分布差异进行归经探讨确定预处理方法后,使用天麻细粉混悬液和天麻钩藤水煎液对成年SHR大鼠进行灌胃处理,分析测定组织内天麻素的含量。结果：原发性高血压（SHR）大鼠,灌胃给药给予天麻混悬液,在肾脏内检测出的天麻素含量高于肝脏中检测出天麻素含量。天麻素在肝脏的分布出现双峰的现象,而在肾脏中并未出现此情况。灌胃给药给予天麻钩藤水煎液后,天麻素的组织分布情况出现了逆转,在肾脏内检测出的天麻素含量低于肝脏中检测出天麻素含量。天麻在与钩藤配伍使用后,在肝脏中,天麻素在其浓度达到最大点时（60min）分布浓度增加,而双峰现象消失；在肾脏中,分布规律并未出现较大改变,但是在其浓度达到最大的时间点时（60min）分布浓度降低。结论：天麻在与钩藤配伍使用后,天麻素在SHR大鼠体内的肝脏和肾脏组织中药物浓度发生了显著性变化,明显的增加了天麻素在肝脏内的最大分布浓度,加速了天麻素的吸收分布和消除速率,提示与钩藤的配伍应用有引导天麻归肝经,加速天麻素在体内的分布和代谢,减少天麻素体内滞留时间的作用。结合配伍前后基因表达差异及药理作用变化的研究结果,提示钩藤对天麻归肝经有协同增强作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 绪论
• 1.1 课题来源及研究内容
• 1.1.1 课题来源
• 1.1.2 研究目的及内容
• 1.2 归经理论研究概况
• 1.2.1 归经的历史和发展
• 1.2.2 归经理论的依据
• 1.2.3 归经理论的分歧
• 1.2.4 归经理论的意义
• 1.2.5 归经理论的研究现状
• 1.2.6 本研究所采用归经理论研究方法
• 1.2.7 肝经及肝
• 1.3 天麻归经概述
• 1.3.1 天麻的本草考证
• 1.3.2 天麻素的药理作用研究
• 1.3.3 天麻素的药动学研究
• 1.3.4 天麻素分析方法的研究
• 1.3.5 天麻归经研究
• 1.4 生物样品预处理概述
• 1.4.1 去蛋白质处理
• 1.4.2 提取净化
• 1.4.3 冷冻干燥
• 1.5 体内药物分析测定方法概述
• 1.6 本研究基本内容及思路
• 第2章 天麻素体内检测方法的建立
• 2.1 仪器、试剂和材料
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2 天麻素（GAS）标准工作液、内标储备液和质控（QC）样品的配制
• 2.3 动物饲养
• 2.4 样品的处理
• 2.4.1 组织样品的采集
• 2.4.2 前处理方法的确立
• 2.4.3 沉淀试剂的确立
• 2.4.4 甲醇比例的确立
• 2.4.5 提取溶剂的确立
• 2.5 色谱条件的确立
• 2.6 方法专属性的验证
• 2.7 标准曲线的绘制
• 2.7.1 最低检测限（LOD）和最低定量限测定（LOQ）
• 2.7.2 肝脏标准曲线的绘制
• 2.7.3 肾脏标准曲线的绘制
• 2.8 样品提取方法回收率及精密度
• 2.9 稳定性实验和重现性考察
• 2.9.1 稳定性实验
• 2.9.2 重现性考察
• 2.9.3 药物在生物样品中的稳定性实验
• 第3章 天麻配伍前后天麻素的组织分布研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 天麻药材的鉴定
• 3.1.2 钩藤药材的鉴定
• 3.2 方法
• 3.2.1 分组及给药方法
• 3.2.2 药液的配制
• 3.2.3 样品的采集及处理
• 3.3 天麻素在组织中的分布含量测定结果
• 第4章 天麻素组织分布与天麻归经探讨
• 4.1 天麻素体内分布
• 4.1.1 配伍前体内药动学特征研究
• 4.1.2 配伍后体内药动学特征研究
• 4.2 天麻归经探讨
• 4.3 与基因表达相结合进行天麻归经探讨
• 4.3.1 基因研究结果
• 4.3.2 体内分布与基因表达相结合进行归经探讨
• 第5章 讨论
• 5.1 实验材料的选择
• 5.1.1 实验动物选择的探讨
• 5.1.2 实验组织选择的探讨
• 5.2 天麻素在SHR大鼠体内检测方法研究
• 5.2.1 样品采集方法的探讨
• 5.2.2 沉淀试剂的讨论
• 5.2.3 提取溶剂的讨论
• 5.2.4 检测方法的探讨
• 5.3 天麻的效应成分天麻素在SHR大鼠组织中的药动学研究
• 5.4 钩藤配伍对天麻的效应成分在SHR大鼠组织中药动学的影响作用研究
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 硕士期间发表的论文
• 附录