论文摘要
目的:1.检测Fas和FasL在卵巢上皮性癌耐药细胞SKOV3/DDP和亲本细胞SKOV3中的表达差异。2.构建含FasL片段的真核表达载体pcDNA3.1（+）/FasL,转染卵巢上皮性癌耐药细胞SKOV3/DDP,检测FasL蛋白的表达情况。3.观察转染前、后耐药细胞的凋亡情况,探讨FasL与卵巢上皮性癌耐药细胞的关系,分析FasL cDNA转染对卵巢上皮性癌顺铂耐药性的影响。4.用顺铂分别作用转染前、后的耐药细胞,观察凋亡情况,初步探讨顺铂与Fas/FasL系统的关系以及FasL联合顺铂治疗卵巢上皮性癌的临床意义。方法:1.MTT法分别检测卵巢上皮性癌耐药细胞SKOV3/DDP和亲本细胞SKOV3的IC50,计算耐药指数。2.RT-PCR分别提取SKOV3/DDP和SKOV3的mRNA,逆转录扩增得到FascDNA和FasL cDNA;凝胶成像系统分析两种细胞Fas表达情况,实时荧光定量PCR技术检测两种细胞FasL表达情况。3.RT-PCR提取宫颈癌HeLa细胞的mRNA、逆转录扩增得FasL cDNA,和质粒pcDNA3.1（+）连接,构建含FasL片段的真核表达载体pcDNA3.1（+）/FasL,检测插入片断DNA的准确性。4.脂质体转染法将重组真核表达载体pcDNA3.1（+）/FasL转染至耐药细胞,用Western-blot法检测转染前及转染后24、48、72小时FasL蛋白表达情况。5.TUNEL法检测转染前和转染后耐药细胞的凋亡情况。6.不同浓度的顺铂分别作用转染前和转染后的耐药细胞24、48和72小时,TUNEL法检测凋亡情况。7.统计分析凋亡结果。结果:1.SKOV3/DDP的耐药指数为5.54,叫进行耐药实验。2.SKOV3/DDP Fas和FasL表达低。3.成功构建含FasL片段的真核表达载体pcDNA3.1（+）/FasL,经测序基因序列符合GeneBank公布的序列。4.转染后耐药细胞FasL蛋白表达增加。5.转染FasL的耐药细胞凋亡指数升高,差异具有统计学意义（P＜0.01）。6.转染前、后的耐药细胞经不同浓度的顺铂作用,转染FasL的耐药细胞凋亡指数升高,差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论:1.FasL低表达是卵巢上皮性癌耐药的原因之一。2.顺铂联合FasL转染卵巢癌细胞可以作为耐药性卵巢上皮性癌新的治疗方法。