白藜芦醇及其二聚体的制备以及在葡萄果实生长中的变化研究

论文摘要

白藜芦醇及其二聚体衍生物是葡萄在抵御真菌侵染、机械和紫外线等伤害时产生的植保素次生代谢产物,对人类健康特别是预防心血管疾病等方面具有显著功效。本试验研究了利用白藜芦醇苷水解产生白藜芦醇、利用白藜芦醇化学氧化聚合产生白藜芦醇二聚体的实验方法,建立了白藜芦醇及其衍生物的薄层层析-紫外分光光度法（TLC-UV）测定方法;并以酿酒葡萄品种（系）蛇龙珠（Carbernet Gernischet）为材料,研究了紫外线处理对果实的白藜芦醇及其二聚体和相关酶活性的影响;研究了果实生长发育过程中白藜芦醇及其二聚体的变化与相关酶活性间的关系。主要研究结果如下:1.通过单因子和多因子的正交试验,确定了白藜芦醇苷酸解产生白藜芦醇的最佳酸解工艺条件是:65℃,8%盐酸,70%甲醇,反应5 h。2.研究了适合白藜芦醇及其二聚体分离纯化的展开剂条件;建立了利用薄层层析-紫外分光光度法（TLC—UV）定性及定量葡萄中白藜芦醇及其二聚体的试验方法。方法学研究表明,采用TLC—UV法测定葡萄中白藜芦醇及其二聚体的含量,方法可行、准确度高、稳定性好、回收率高。3.比较了常温提取、冷冻提取和热烫提取等三种方式从葡萄果皮中提取白藜芦醇及其二聚体的效果。结果表明,冷冻提取可明显提高白藜芦醇及其二聚体的含量。4.研究了紫外线（UV）辐射对葡萄中白藜芦醇及其二聚体合成的诱导作用。研究表明,UV诱导能提高果实中白藜芦醇及其二聚体的含量,UV的适宜辐射时间为300s。UV辐射后在25℃下黑暗中贮存24h,可使白藜芦醇含量提高3.7倍,白藜芦醇二聚体含量提高5.25倍。5.研究了葡萄果实生长发育过程中白藜芦醇及其二聚体与苯丙氨酸解氨酶（PAL）和过氧化物酶（POD）之间的关系。结果表明,果实生长发育过程中,蛇龙珠果实的白藜芦醇含量和PAL活性的最高峰均出现在转色期,说明PAL和果实中的白藜芦醇的形成存在一定的相关性。蛇龙珠果实的白藜芦醇二聚体随果实生长而逐渐增长,绿果期和转色期含量较低,到成熟期达到最高;而POD活性也呈现出相同变化趋势,说明POD和果实中白藜芦醇二聚体的形成存在一定的相关性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 1 文献综述
• 1.1 植物中白藜芦醇及其二聚体的理化性质
• 1.2 白藜芦醇及其二聚体的生物合成与诱导
• 1.2.1 白藜芦醇的生物合成途径
• 1.2.2 白藜芦醇生物合成的诱导因素
• 1.2.3 白藜芦醇衍生物的生物合成
• 1.3 白藜芦醇及其二聚体的化学合成途径
• 1.3.1 化学合成
• 1.3.2 从天然植物中提取白藜芦醇
• 1.3.3 白藜芦醇低聚物的酶促合成
• 1.3.4 利用植物组织细胞培养制备白藜芦醇
• 1.4 葡萄生育期间白藜芦醇的变化
• 1.4.1 葡萄不同品种、不同部位的白藜芦醇含量差异
• 1.4.2 产地生态条件的影响
• 1.4.3 环境胁迫的影响
• 1.5 葡萄酒酿造中白藜芦醇的变化
• 1.6 白藜芦醇及其二聚体的分析测试方法
• 1.6.1 薄层扫描法（TLC）
• 1.6.2 毛细管电泳法（CE法）
• 1.6.3 高效液相色谱法（HPLC法）
• 1.6.4 气质联用法（GC/MS法）
• 1.6.5 示波分析法
• 1.7 白藜芦醇的药理作用
• 1.7.1 抗癌作用
• 1.7.2 对心血管、高血脂疾病的防治作用
• 1.7.3 雌激素样作用和对骨代谢的影响
• 1.7.4 抗菌作用
• 1.7.5 对细胞周期、细胞增生及凋亡的影响
• 1.7.6 护肝脏的作用
• 2 引言
• 2.1 研究目的及意义
• 3 材料和方法
• 3.1 试剂和试材
• 3.1.1 标准品与试剂
• 3.1.2 试材
• 3.2 仪器和设备
• 3.3 试验设计
• 3.3.1 白藜芦醇苷酸水解的单因素实验
• 3.3.2 白藜芦醇苷酸水解的正交实验
• 3.3.3 白藜芦醇苷酸水解产物的鉴定
• 3.3.4 白藜芦醇二聚体制备的试验研究
• 3.3.5 葡萄果皮中白藜芦醇及其二聚体提取条件的研究
• 3.3.6 白藜芦醇及其二聚体的薄层层析—紫外分光光度法（TLC-UV）分离纯化检测条件的研究
• 3.3.7 紫外处理对果实白藜芦醇及其二聚体含量和相关酶活性变化的影响
• 3.3.8 葡萄果实生长期间白藜芦醇及其二聚体含量变化的研究
• 3.4 测定方法
• 3.4.1 高效液相色谱测定白藜芦醇及其二聚体
• 3.4.2 质谱测定白藜芦醇及其二聚体
• 3.4.3 葡萄果实酶活性指标的测定
• 3.5 统计方法
• 4 结果和分析
• 4.1 白藜芦醇的制备及其鉴定
• 4.1.1 白藜芦醇苷水解的单因素实验
• 4.1.2 白藜芦醇苷水解的正交实验
• 4.1.3 酸解产物的鉴定
• 4.2 白藜芦醇二聚体的制备和鉴定
• 4.3 葡萄中白藜芦醇及其衍生物的薄层层析—紫外检测方法的建立
• 4.3.1 葡萄果皮中白藜芦醇及其二聚体的提取
• 4.3.2 葡萄果皮中白藜芦醇及其二聚体的鉴定
• 4.3.3 方法学研究
• 4.4 紫外线处理对采后葡萄果实白藜芦醇及其二聚体含量变化和相关酶活性的影响
• 4.4.1 不同辐照剂量的影响
• 4.4.2 紫外处理后放置时间的影响
• 4.4.3 紫外处理后不同温度的影响
• 4.4.4 紫外处理后光照的影响
• 4.5 葡萄果实生长发育期间白藜芦醇及其二聚体和酶活性的变化
• 4.5.1 白藜芦醇及其二聚体的变化
• 4.5.2 苯丙氨酸解氨酶活性的变化
• 4.5.3 过氧化物酶活性的变化
• 5 讨论
• 5.1 白藜芦醇及其二聚体的薄层层析—紫外分光光度法的建立
• 5.2 白藜芦醇酸解方法
• 5.3 葡萄生长发育过程中白藜芦醇及其二聚体的合成代谢
• 5.4 紫外线对白藜芦醇及其二聚体合成代谢的影响
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介