论文摘要
背景和目的原发性肝细胞癌（HCC）是一种常见恶性肿瘤,其发病隐匿,早期无明显的症状,而且恶性程度高、进展快,临床就诊时约2/3的患者已属中晚期,五年生存率很低,因此,早期诊断是提高肝癌疗效的关键因素之一。AFP是目前最常用的检测肝癌的比较敏感和可靠的血清学指标,大约60-70%的肝癌患者血清AFP阳性。寻找出一个新的、在AFP阴性血清也能检测到的特异的标志物将可提高肝癌的早期诊断水平,进而达到早期治疗提高疗效目的。近来一些研究表明GPC-3很可能是一个敏感的肝癌标志物和基因治疗的靶基因,本研究对大量血清标本和组织进行检测,明确HCC患者中GPC-3表达情况、及其表达水平和临床参数之间的关系。同时通过检测人肝癌及相应癌旁肝组织中GPC-3与IGF-Ⅱ基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况,进一步揭示HCC的发生发展机理。方法对大量血清标本进行ELISA检测（肝癌患者血清60份、正常人14份、肝炎或肝硬化患者血清各13份）。用RT-PCR检测GPC-3与IGF-Ⅱ基因的mRNA和在70例人肝癌组织、癌旁肝组织和18例正常肝组织中的表达情况,以及与肝癌患者的血清AFP水平、肿瘤个数、肿瘤直径、临床分期、有无术后复发、有无肝外转移、有无门静脉癌栓、病理分级等指标的关系。同时用免疫组织化学方法检测GPC-3与IGF-Ⅱ基因的蛋白在80例人肝癌组织、癌旁肝组织和8例正常肝组织中的表达情况,以及与肝癌患者的血清AFP水平、肿瘤个数、肿瘤直径、临床分期、有无术后复发、有无肝外转移、有无门静脉癌栓、病理分级等指标的关系。结果GPC-3血清中阳性临界浓度定为60pg/ml时,GPC-3肝癌患者血清中的阳性率为:66.67%（40/60）;GPC-3在肝炎、肝硬化组血清中的阳性率为:15.38%（2/13）;在14例正常人血清中不表达。GPC-3在肝癌血清中的阳性率明显高于在肝炎、肝硬化组血清中的阳性率,两者比较有显著性差异性（P＜0.05）。GPC-3在肝癌患者血清中的表达与临床分期、肝外转移、术后复发及血清AFP水平相关（P＜0.05）,而与门静脉癌栓、肿瘤个数、肿瘤大小、HBsAg及肿瘤分化程度无明显关系（P＞0.05）。在人肝癌血清中,GPC-3的阳性率（66.67%）与AFP的阳性率（66.67%）未见差异（P＞0.05）。用RT-PCR检测到70例HCC组织中GPC-3mRNA的阳性率为82.85%（58/70）明显高于癌旁组织的阳性率34.28%（24/70）（P＜0.01）;58例HCC组织中GPC-3mRNA表达水平（0.596±0.205）明显高于24例癌旁组织中表达水平（0.428±0.137）（P＜0.05）;18例正常肝组织中未检测到GPC-3的表达。70例HCC组织IGF-ⅡmRNA阳性率为92.86%（65/70）明显高于癌旁组织的阳性率81.43%（60/70）（P＜0.05）;65例阳性表达IGF-ⅡmRNA的HCC组织中表达水平为（0.750±0.309）明显高于在60例癌旁肝组织中的表达水平（0.648±0.237）（P＜0.05）;18例正常肝组织IGF-Ⅱ基因的表达水平（0.495±0.192）。GPC-3 mRNA和IGF-ⅡmRNA在肝癌组织中的表达呈正相关（相关系数r=0.281,P=0.038）,而两者在癌旁肝组织的表达无相关性（相关系数r=-0.165,P=0.500）。用免疫组化方法检测GPC-3、IGF-Ⅱ在肝癌组织中的阳性率分别为73.75%和76.25%,而在癌旁肝组织中的阳性率分别为53.75%和48.75%,差异有显著性（P＜0.05）;在癌组织中glypican-3与IGF-Ⅱ的表达呈正相关。两种方法检测同时发现glypican-3基因和IGF-Ⅱ基因在人肝癌组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度、肝外转移及肿瘤大小相关（P＜0.05）,而与门静脉癌栓、肿瘤个数、血清AFP水平及术后复发无明显关系（P＞0.05）。结论GPC-3在HCC患者血清中中特异高表达,可作为一肝癌血清标志物;其与AFP联合检测可有效的提高肝癌的诊断率;血清中GPC-3与肝癌的临床分期、肝外转移、术后复发及血清AFP水平等密切相关,可作为监测肝癌愈后及预防复发的指标。GPC-3与IGF-Ⅱ基因在肝癌组织异常高表达,可促使肝癌细胞增殖,两者可能在HCC的发生、发展和转移中起重要作用;它们作为分子靶标在肝癌的基因诊断和治疗中的作用尚待进一步探讨。